期初報告 - 生物資訊學系 - 中華大學.docVIP

中華大學生物資訊學系 大學部學生專題研究計畫期初報告 計畫名稱： LQT-3及BrS病人的SCN5A基因多型性分布之鑑定 Identification of polymorphism distribution in cardiac sodium channel gene SCN5A for patients with LQT-3 and Brugada syndrome. 組員：王姿婷、揚芷、姚秋綺 計畫編號：9810 研 究 期 間 ： 100年2月1日至 101年1月底止 指 導 教 授 ：曾文慶 中華民國 100 年 3 月 6 日 研究計畫內容（以10頁為上限）： 摘要 心臟鈉離子通道基因SCN5A位於染色體3p21的位置，共有28個Exon，總長約80kb。此基因突變會造成遺傳性的心律不整，更會導致猝死(Sudden death)。LQT-3及BrS主要是因SCN5A突變導致的。LQT綜合症是一種遺傳性心臟疾病，主要是因心室快速性心律失常，會導致昏厥、癲癇及猝死等症狀。目前已知有14種以上LQT，其中LQT-3為致死率最高的種類。BrS一般發病在年約40歲的年輕男性身上，症狀主要為在睡眠中死亡，BrS也會出現在小孩及剛出身的嬰兒身上，並導致猝死。由於Brugada syndrome(BrS)與LQT-3皆為心因性猝死之重要原因，本研究與為恭醫院合作，分析患者SCN5A基因多型性分布 研究動機與研究問題 由於心臟疾病是目前國人常罹患的疾病之一，且致死率已僅次於癌症，從成人到嬰兒因心臟病猝死的案例增加，其中遺傳性心律不整更是重要因素之一。隨著心律不整的案例逐年增加，促使許多學者研究致病的關鍵因素—致病突變基因，LQT患者是具較高心律不整甚至致死的高危險群，因此篩檢致病突變基因與治療鈉離子通道基因突變的心臟疾病更顯重要。SCN5A(心臟鈉離子通道基因)突變是已知的突變基因導致LQT-3及BrS，本專題以研究與LQT-3及BrS有關的SCN5A為研究對象，利用SSCP的技術分析SCN5A的28個EXON，觀察其中是否含有特定的多型性，為導致LQT-3及BrS的致病突變。 目前台灣地區並無相關鈉離子通道的檢測，本研究希望與為恭醫院合作，篩選LOT-3及BrS高危險群患者的致病突變基因，來推展SCN5A基因檢測，希望能減少心律不整的猝死率。由於在SCN5A基因中，Exon25、26、27具有高保留性，林以這三組Exon為目標做多型性的分析，結果發現了受測者D在xon26及xon27間之intron上含有一個單核苷酸多型性 文獻回顧與探討 LQT是一種遺傳性心臟疾病，主要特徵為心電圖中的QT段有明顯延長，就是Q-T間期延長超過0.46秒(正常人一般小於0.44秒)，目前和LQT有關的致病基因有14種，患者易導致各種心律失常，尤其是嚴重的心室性心搏過快，容易發生心臟猝死，其中LQT-1、LQT-2、LQT-3佔已知基因型90%，LQT-1與LQT-2各占約40%，LQT-3佔10%， LQT-3在LQT中雖然發生率較少，但死亡率卻是所有LQT中最高的，LQT-3是由於SCN5A基因的突變，1995年時， George et al確認了SCN5A位於染色體3p21的位置。SCN5A基因包含28個Exon，總長約80kb，導致細胞膜上鈉離子通道的次單位產生突變，使得鈉離子通道無法正常發揮功能，造成心肌再極化異常。BrS是一種可能致死的心室性心律不整疾病。它在心電圖 V1-3上會有特殊的ST段上升，但QT間距正常且無任何心臟結構問題。臨床表現可突然暈厥或猝死，平均發病年齡在四十歲左右，以男性為多。BrS是造成年輕人猝死或暈厥常見的原因之一，目前醫學上認為是一種基因異常所引起的疾病，主要與鈉離子通道代謝異常有關，發生率因地而異，好發於十七歲至四十歲左右健康男性，因此又稱為“年輕男性猝死症候群”。 BrS係在1992年由日本醫師Brugada最早提出，此病主要發生在東南亞及日本之年輕男性。 ↓ 篩選符合LQT-3/BrS之患者 ↓ 取得血液樣本 ↓ 萃取Genomic DNA ↓ PCR放大各Exon片段 ↓ SSCP分析PCR產物 ↓ 對具有多型性之PCR產物Ligation 及 Transformation ↓ 藍白篩 ↓ CLONING具多型性PCR Product ↓ 定序CLONING產物 ↓ DNA序列比對 ↓ 確認多型性/致病突變 圖一、SCN5A基因多型性分布之鑑single-strand conformation polymorphism) 單鏈構象多態性是一種分離核酸的技術，