骨水泥阻塞髓腔后骨内压升高对远侧关节影响的实验研究_医学论文.docVIP

骨水泥阻塞髓腔后骨内压升高对远侧关节影响的实验研究_医学论文 骨水泥阻塞髓腔后骨内压升高对远侧关节影响的实验研究_医学论文 作者：李宏宇，安洪，梁斌，李荣祝，田文，韦敏克【摘要】 ［目的］探讨骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔后骨内压升高对远侧关节组织结构的影响。［方法］将26只实验兔分成4组，随机取出8只不做模型而作为正常对照组，其余18只采取左侧股骨髓腔内灌注聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）骨水泥而右侧不灌注,制作骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔的动物模型，根据不同观察时间段随机分成术后4（T4）、8（T8）和16周（T16）3个观察组。对正常对照和模型动物实验侧股骨远端软骨、软骨下骨和滑膜组织标本，采用HE染色、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学检测及透射电镜方法进行组织结构观察。［结果］（1） HE染色：关节软骨、软骨下骨和关节滑膜组织损害随时间呈进行性加重，造模16周关节软骨破坏，骨组织结构损害，滑膜组织增生、肿胀。（2） 甲苯胺蓝染色：造模16周关节软骨全层失染。（3） 免疫组化：①Ⅱ型胶原:造模16周软骨细胞染色阳性。②TGF造模16周软骨细胞染色阳性，关节滑膜细胞染色阳性。（4） 透射电镜：关节软骨和骨细胞损害随时间呈进行性加重，造模16周部分软骨细胞和骨细胞坏死、崩解。［结论］骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔后导致股骨远端血循环障碍，骨内压升高，持续骨内高压加重了股骨远端的缺血缺氧状态，使股骨远端骨代谢发生紊乱，最终造成股骨远端骨、软骨和滑膜组织发生了退变或坏死。 【关键词】 骨水泥； 骨内高压； 远侧关节； 退变或坏死 　目前临床上骨水泥型人工关节的应用仍然非常普遍，而骨水泥型人工关节存在的缺陷可以造成许多并发症〔1、2〕。作者研究发现，骨水泥填塞骨干髓腔后可以导致股骨远端骨内压明显升高并持续存在〔3〕，该改变对股骨远端骨关节的影响很有研究价值。在这里作者模拟骨水泥型人工关节制作了骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔的兔动物模型〔4〕，重点观察骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔后对股骨远端关节组织结构的影响情况。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物、药品、材料和仪器 　　成年新西兰大白兔26只，雌雄不限，体重均在2.6～3.5 kg之间。Ⅱ型胶原一抗（collagen Ⅱ）、TGF一抗（北京中山生物化学技术公司），生物素化山羊抗兔IgG二抗（武汉博士德公司），甲苯氨蓝（25 g/瓶，美国Sigma公司），HE（美国E.M.Chemicals公司）。国产聚甲基丙烯酸甲酯（polymethylmethacrylate）TJ骨水泥（天津市合成材料工业研究所生产），16#上颌窦穿刺针（外径1.6 mm,内径1.05 mm,长80 mm），日本Olympus公司光学显微镜（BH型，LM），日本Hitachi公司透射电子显微镜（H，SEM）。 　　1.2 动物模型建立方法和分组 　　采用兔左侧股骨髓腔内灌注骨水泥而右侧作为对照侧的方法。肌注速眠新麻醉后（0.15 ml/kg），俯卧位固定在特制卡压式兔手术台上，采用髋后外方入路，根据兔存在第3转子这个特殊的解剖结构，从股骨后外方肌间隙进入，在第3转子上方仅切除大转子外侧部分而不打断股骨颈，暴露转子间窝，找到骨髓腔入口，用自制的大小合适、粗细不同的髓腔锉反复扩髓后（深度为股骨长度的1/2），反复冲洗创面，冲出破坏的骨髓组织，沙布条沾干。按粉、液比2：1比例调配骨水泥（PMMA），持续手工搅拌，待聚合至面团状态后使用，为避免PMMA填入股骨骨髓腔后深度无法控制，首先将一小块面团状PMMA作成髓腔大小塞状物,用器械轻轻填入髓腔内至股骨中段狭窄处，作为髓腔塞，待10 min PMMA基本固化后，再将其重新调配好（方法同上）呈面团状PMMA，用器械填入股骨髓腔内，直至填满为止。待PMMA完全固化后，缝合关闭切口。将26只实验兔分成4组，除随机取出8只不做模型作为正常对照组外，其余18只均按照上面方法制作骨水泥阻塞骨干髓腔的动物模型，根据不同的观察时间段随机分成术后4（T4）、8（T8）及16周（T16）3个观察组，每组6只。 　　1.3 标本收集方法 　　处死正常兔8只，术后4、8及16周组模型兔各6只。其中一半动物取左侧股骨远端关节软骨、软骨下骨、滑膜标本，进行HE染色、甲苯胺蓝染色和免疫组织化学处理，光镜观察。而另一半动物取左侧股骨远端关节软骨、软骨下骨标本，行透射电镜观察。 　　1.4 普通HE染色方法 　　取出标本放入10％甲醛固定48 h，8％EDTA脱钙3～4周，乙醇逐级脱水，二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明，有机溶液浸泡，石蜡纵向包埋，切片机将石蜡块切成4 μｍ厚的薄组织切片，普通HE染色，光镜观察。 　　1.5 甲苯胺蓝染色方法 　　切片脱蜡,二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明，乙醇逐