荧光抗体染色法检测猪瘟地研究.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 立了AC．ELISA方法，既保证了方法的特异性和敏感性，而且操作便捷、省时，易于推广。 的诊断与检测中需要与BVDV加以鉴别。该项工作主要借助于单克隆抗体技术。本试验用自行研制的 CSFV特异性单抗IE2、387和486与兔抗CSFVIgG建立了双抗体夹心间接ELISA方法用于检测感染 可望达到与BVDB鉴别诊断的目的。 CSFV抗原，样品的处理是试验成功的关键，用常规方法处理难以达到目的。我们参照文献方法…1将待 检组织制成悬液，采用NP．40涡旋的方法，破坏了病毒外膜，使抗原表位易于捕捉，取得了满意的效果。 通过对临床组织样品的检测，证明该方法的敏感性、特异性较好，与病毒分离和RT-PCR方法符合率较 高。 从不同组织的检测结果来看，脾脏的检出率最高，而且该组织柔软易碎，便于处理，可作为首选组 L等Ⅲ1对CSFVC株感染后扁桃体、脾脏和淋巴结等组织的检出时间和检测阳性率上看不出差异，而且 率高于扁桃体。本试验中检测的扁桃体数量偏少，难以下定论。鉴于扁桃体具有病毒增殖时间早和便于 活体取材的优点，在今后AC．ELISA试验方法的应用中还应对其在临床早期诊断中的应用价值进行深入 研究。 ， 来，能够短时间内准确、快速地直接检测大批量样品中的CSFV抗原，明显优于病毒分离和免疫荧光等 方法，而且具有半自动化的特点，能自动显示结果，更适合于各级兽医研究机构和生产单位应用。 参考文献略 荧光抗体染色法检测猪瘟的研究 戴爱玲李晓华杨小燕 (福建龙岩学院动物医学研究所2225726) 摘要：利用荧光抗体技术检测病猪的内脏器官可能存在的猪瘟病毒，对猪瘟的早期诊断具有十分重要意义， 猪瘟的常规诊断需要4．5天，而该项技术可在半天之内作出判断，既快速又客观、准确，在规模化猪场临 床上可得到很多广泛应用。 关键词：猪瘟；荧光抗体染色技术；诊断 猪瘟是一种最严重的传染病之一，被国际兽医局(OIE)的国际卫生法规定为16种法定检疫病之一。 目前，猪瘟仍对养猪业造成重大的经济损失，且流行特点和表现形式正在发生较大的变化，因此，给该病 的诊断和防治带来一定的困难。为此，我们课题组几年来对猪瘟的检测进行了研究和分析，通过比较兔体 交互免疫实验、ELISA血清学实验、猪瘟荧光抗体染色技术三种方法，发现猪瘟荧光抗体技术既快速又方 便，能在半天对猪瘟作出正确的判断。 1．材料与仪器 ’ 359 猪传染病 猪瘟荧光抗体试剂购自中国兽药监测所，显微镜为日本奥林巴斯(OLY御US)的l㈣4的系统显 微镜。 2．方法 2．1触片制备 无菌采取可疑病猪的淋巴结、扁桃体、脾脏、肾脏后，用消毒的剪刀剪取-d,块组织，触压在洁净无 划痕的载玻片上，触片时，尽量不要重叠，以l五层细胞为宜，触面不能有过多的组织液，若组织块有 过多的组织液，在滤纸上轻轻吸去组织液体，再进行触片，在触压肾脏切面时，尽量减少组织颗粒留在触 痕上，一般肾切面的第一、二个触片不用，若用冰冻切片机制各冰冻组织切片，片膜厚约为5．7微米。触 片在室温中自然干燥。 2．2固定 中自然干燥。 2．3染色 取已固定的触片，滴加猪瘟荧光抗体染色试剂，以染色剂覆盖触膜为宜，平稳地置于湿盒37℃感作 40_-60分钟，促进荧光抗体与细胞胞浆里的抗原发生特异性结合。在染色过程中切忌染色液干涸。触片如 不能尽快染色时，可置于低温冰箱保存。在染色方法上，有些资料介绍把触片浸没在染色剂中，本人通过 多次实验，发现这种方法若染色2—3次，染色效果好，染色次数多了，染色剂污染变得混浊，影响下次 染色。试验中同时设猪瘟的阴、阳性对照。 2．4漂洗 用PH7．2PBS漂洗3次，漂洗时动作轻柔，避免触膜洗脱。 2．5观察与判断 ． 滴加缓冲甘油于触片上，把触片置于荧光显微镜下镜检，在视野里细胞轮廓清晰，胞浆