慢性淋巴细胞白血病非凋亡程序化死亡途径缺陷及其分子机制探讨.pdfVIP

of ·147· 中国实验血液学杂志JournalExperimental 2011增刊 Hematology B172 慢性淋巴细胞白血病非凋亡程序化死亡途径缺陷及其分子机制探讨 刘澎 沈文怡 朱华渊 吴微伏媛董华洁 朱远东 陈浩月 李建勇 南京医科大学第一附属医院 江苏省人民医院 南京210029 目的：慢性淋巴细胞白血病(chronic 突变实验和Chromatin lymphocytic leukemia，CLL)是一种成熟B淋巴细胞克隆增殖性疾 病。相对于绝大多数肿瘤细胞的侵袭性增殖特征，CLL 敲除CLL细胞内超表达的LEFl，采用流式细胞术考察 细胞主要表现为死亡抵抗。细胞死亡主要有凋亡和坏 其后细胞对TNF 死两种方式。前者是受周密调控的死亡形式；后者则 及伴随的ROS水平变化。 被认为是细胞对严重打击的急性反应。新近研究表 结果：①TNFd(30 明，细胞内还存在一种受严密调控的死亡程序一一 同处理24h显著增加正常CDl9+B细胞非凋亡程序化死 亡的比例及伴随的ROS水平，而原代CLL细胞在干预 Necroptosis(非凋亡程序化死亡)。RIPl及kiP3激酶 是调控Necroptosis途径的关键因子，而由CYLD介导的前后这两个数字均无明显变化；②与正常CDl9+B细 RIPl去泛素化对该途径启动至关重要。此外，细胞内 的活性氧簇(ROS)被认为是Necroptosis的执行者之 一。生理情况下Necroptosis于凋亡程序受阻时作为备选 的细胞死亡途径，在清除微生物感染的细胞时发挥功 能；其在肿瘤发生和进展中的作用目前所知甚少。由 在mRNA和蛋白水平的表达；(互)Luciferase reporterassay 于细胞内Necroptosis和凋亡的传导途径存在很大差异，和启动子突变实验证实过表达LEFI明显激活CYLD启 在凋亡抵抗的癌细胞如cLL细胞内启动Necroptosis死亡动子的转录活性，启动子区域内LEFl的结合序YU(5’一 机制有望成为崭新的肿瘤治疗手段。本研究首次揭示 了CLL细胞中肿瘤坏死因子Ot(TNF{It)诱导的 动子区域内的特异序列区间；⑥应用特异siRNA敲除 Necroptosis死亡途径的缺陷并探讨了该缺陷形成的分子 机制。 CLL细胞内超表达的LEFl后，CLL细胞对TNFd与 方法：流式细胞术检测TNF Ot与Caspase抑制剂 zVAD作用下原代CLL细胞死亡比例及伴随的ROS水平平均显著增加。 RT—PCR和western 变化；应用real-time blot方法检测 CLL细胞内RIPl、RIP3、CYLD及LEFl的表达情况；程序存在缺陷，该途径关键调节因子RIP3、CYLD的 应用siRNA介导的基因沉默技术和LEFl过表达实验考 察LEFl对CLL细胞内CYLD表达的影响；将CYLD转录分子LEFl是CLL细胞内CYLD基因的转录负调控因子； to-41 启始点上游(-1995bp)DNA序列克隆至pGL3- Basic表达载体内；采用Luciferase CLL的新方法。 reporterassay、启动子