痘苗病毒减毒载体的生物学特性及安全性试验研究.pdfVIP

其他动物的健康养殖与疫病防控 703 0 T060017 痘苗病毒减毒载体的生物学特性及安全性试验研究 王宇航1’2阚式绂1’2杜寿文1’2齐延新1’2李霄2金宁一2 (1．吉林大学畜牧兽医学院。吉林长春130062； 2．中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所， 吉林长春130122) 引言／目的 痘苗病毒(VaccinaVirus，vACV)可作为载体广泛应用于多种疾病的防治，但其产生的副作用很 可能在未来疫苗研究中复合出现，所以构建一种安全的、新型的载体是十分必要的。检测天坛株痘苗病 抗原的重组痘苗病毒载体更深入的研究奠定基础。 材料方法 首先采用蔗糖密度梯度离心法纯化病毒，透射电镜观察病毒形态的变化，结晶紫染色法以及MTI 法分析E3L．ttVV在不同细胞中的细胞毒性，同时设野生型ttVV对照。然后分别通过鼻腔接种和颅内接 种不同滴度的E3L—ttVV监测对小鼠体重变化及小鼠死亡情况，家兔皮内接种进一步分析不同滴度的 E3L．ttVV的体内毒力，同时设野生型毒株对照。 结果 后无明显痘斑。痘苗病毒减毒载体毒力大大降低。 讨论 痘苗病毒E3L是干扰素抗性基因，E3L蛋白对机体固有的免疫反应具有抑制作用，且对于痘苗病毒 在小鼠模型中的毒力的发挥是必须的。因此，该基因的敲除可以达到减毒的目的，降低痘苗病毒天坛株 的野毒毒性，以期成为蛋白表达、重组活载体疫苗等研究及应用领域的安全工具。实验通过多方面测定 了减毒株E3L—ttW的安全性，通过结晶紫染色和MTF染色法检测重组毒在五种细胞中的细胞毒性，减 毒株在很大程度上降低了感染及复制能力。由于天坛痘苗病毒具有一定的嗜神经毒性，对皮肤以及全身 可引起系统性反应。并且，BALB／cdx鼠对痘苗病毒敏感，因此可以广泛应用于痘苗病毒细胞毒性的测 定，以及在体内的扩散、复制水平。实验动物体征说明减毒株的嗜神经毒性降低以及病毒的毒性及复制 能力有效的降低，证明减毒株在体内高度减毒的体内特征。因此，获得的减毒株比天坛株更安全，可应 用于活病毒载体疫苗针对异种病原引起的疾病的防治，并且更具有安全性。痘苗病毒因本身具备稳定性 好、基因组含大量非必需基因、能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫等优点，本实验对其进一步进行有 效减轻毒，较少对机体的副作用，随着现代生物技术的进一步应用，E3L—ttVV有望成为一株减毒高效 病毒载体用于科学研究及生产。 参考文献(略)