放线菌次生代谢产物对稻瘟病菌的抑菌活性筛选.pdfVIP

“第九届全国新农药创制学术交流会”论文集 放线菌次生代谢产物对稻瘟病菌的抑菌活性筛选 杨佩文1，李铭刚2，番华彩1，赵江源2，曾莉1，丁章贵2，文孟良2 (1云南省农业科学院农业环境资源研究所，昆明650205； 2云南大学微生物研究所，云南省生物资源保护与利用重点实验室，昆明650091) 摘要：为开发防治稻瘟病的新农药，对334株放线菌发酵提取物，通过对孢子萌发抑制，菌丝生长抑制 和温室盆栽防治效果测定，初步筛选出孢子萌发抑制率85％以上的20个菌株，对稻瘟病菌茵丝生长有较 强抑制能力的19个菌株，温室盆栽防治效果70％以上的14个菌株，筛选到一批具有很好开发应用前景的 放线菌资源． 关键词：稻瘟病；放线菌；抑菌作用 由稻瘟病菌[Pyricularia 最具毁灭性的病害之一llJ。化学药剂作为防治稻瘟病的重要手段，目前仍发挥着不可替代的重要作用。 但由于长期大量施用化学药剂，抗药性已成为F1前农业生产和农药工业所面临的最突出的问题【2’3一i。 寻找广谱、高效、低毒的生物农药已成为开发的热点之一15“一‘3l。我州微生物资源丰富，发展微牛物 农药具有充分的优势，尤其放线茵是具有很高实用价值的一类微牛物。目前，从微生物中发现10000余 种抗牛素，约70％为放线菌所产牛19l。此外，放线菌还产牛酶制剂、氨基酸等其它各类有用物质，如游 动放线菌属就可产生氨基酸类、放线菌素类、多烯类、酮类等各种抗生素Do]。在国内从十壤中分离筛选 植物病害拮抗放线菌已有许多报道…’121,由放线菌的次生代谢产物进行抗生素制备的新农药由于其 具有尤污染、无残留、可冉牛、难以使有害牛物产牛抗药性、易于产_p化、成木低等特点．己成为尤公害 农药的主体和未来农药的发展方向㈦14·15·1们。云南省气候多样，地形复杂，自．着丰富的微牛物资源【17． 1Sl。充分利用云南省丰富的微生物资源，开发新颖的、与环境相容性好、具有自主知识产权的微牛物农 药，具有强烈的现实意义和深远的科学意义。本文报道了防治稻瘟病放线菌的筛选试验结果。 l材料和方法 1．1供试放线菌菌株 供试334株放线菌为云南各地土壤中采集和分离得到的菌株。 1．1．I放线菌培养基 1000mL、pH7．2。 发酵培养基：大豆粉209、蛋白胨29、葡萄糖209、淀粉59、酵母膏59、NaCI49、K2HP040．59、 MgS0479、H200．59、CaC0329、水1000mL、pH7．8。 1．1．2菌株发酵培养液的制备 10％的接种量接种于lOOmL发酵液中，220rpm振荡培养120h。 1．1．3发酵液的后处理 通讯作者：文孟良，教授，主要从事微生物源新农药创制研究。mlwen@126．corn 第一作者：杨佩文(1973一)，男，云南丽江人，副研究员，博士，主要从事植物病理学研究。 “第九届全国新农药创制学术交流会”论文集 上蒸去乙醇，水相采用冻干仪冻成千粉后置于提取物保存库。 1．2对稻瘟病菌活性测定 1．2．1供试水稻品种 x 蒙古稻：蒙古稻种子浸泡催芽后，播于装有秧田土的长宽为5 15cm，深lOcm塑料育苗盒内，每 盒50苗，在温室内育苗，按0．2克／盒追施尿素，共23次。试验用药前一天选择3．5叶期长势一 致盆栽稻苗，按序排放，供试验用。 1．2．2供试稻瘟病菌 Y69(117b)：菌株在鉴定供试材料播种后一星期，用燕麦培养基于24℃下培养，待荫丝长满培养基 后，用自来水洗去气生茵丝，日光灯(400nm)照射下培养产孢，2～3天待产孢后，用蒸馏水洗’F孢子， 并加入0．02％Tween--20佑1]成孢子悬浮液，孢子浓度为lOx10低倍镜下每个视野30-～40个孢子，待用。 1．2．3孢子萌发抑制测定 取供试病原荫的孢子配成适当浓度的孢子悬浮液，在lOxl0低倍镜下，每个视野有30-40个孢子。 将发酵液与孢子悬浮液等体积混合，取一滴滴加在凹玻片上，每处理3次重复。在25C下保湿培养18h 后检查对照孢子的萌发。当对照的萌发率达到85％后，检金所有处理的孢子萌发率。以孢子芽管长度大 于孢子长度一半者为萌发，按以下公式计算孢子萌发抑制率： 孢子萌发抑制率(％)=(对照孢子萌发率．处理孢子萌发率)／(对照孢子萌发率)×100 1．2．4菌丝牛长抑制测定 将