16-O-去甲基去氧乌头碱在肠内细菌中的生物转化研究.pdfVIP

第35卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第12期 Chinese of 1711～1715 2007年12月 Joumal AnalyticalChemistry 16．o．去甲基去氧乌头碱在肠内细菌中的生物转化研究 赵宇峰1’2 宋凤瑞1 越皓1 国新华1 李慧琳1 刘志强1 刘淑莹“ 1(中国科学院长春应用化学研究所，长春130022)2(中国科学院研究生院，北京100039) 摘要采用人肠内细菌和乌头碱体外温孵的方法，探讨乌头碱的代谢产物16—0一去甲基去氧乌头碱在人肠 内的生物转化。利用离子阱电喷雾串联质谱(EsIMS／Ms“)方法直接分析16—0一去甲基去氧乌头碱的代谢产 物。乌头类生物碱在EsI正离子模式条件下形成质子化分子[M+H]+。16—0一去甲基去氧乌头碱可被人肠 内细菌转化，通过脱乙酰基、脱苯甲酰基、脱甲基、脱羟基以及酯化反应产生新型的单酯型、双酯型和脂类生物 碱等10余种代谢产物。双酯型生物碱具有较高的毒性，相对应的单酯型和脂类生物碱毒性较低。16一O一去甲 基去氧乌头碱被肠内细菌转化为单酯型和脂类生物碱会使其毒性降低。 关键词16—0．去甲基去氧乌头碱，肠内细菌代谢，生物转化，电喷雾质谱 1 引 言 毛茛科乌头属植物附子、川乌(AconifⅡmcormic^口e如debx．)和草乌(Aco凡itum后粥n积嘶iReichb．)常 被用于强心、止痛、消炎等传统中药方剂中，但它们都具有较大的毒性¨J。虽然它们的药效早已被证 实，但其作用机理还不十分清楚。中药一般多为口服用药，其有效成分在到达吸收的靶器官之前，或者 被消化道吸收经胆汁排泄后，在肠道内受到肠内细菌的作用旧1，其所含成分被寄生在消化道的肠内细 菌代谢，这些代谢产物对于有效成分的发现必然起到重要作用。因此，用肠内细菌可以作为研究中药成 分的代谢的方法p、41。 几种脂类生物碱。这些脂类生物碱的毒性低于乌头碱。本研究组近年来利用电喷雾串联质谱技术对含 乌头类植物复方中药分析和配伍进行系列研究M~8J。本研究利用上述技术，对乌头碱的代谢产物16一O- 去甲基去氧乌头碱(16一O．demethyl 析，来表征代谢产物的化学结构，从而对乌头碱的生物转化有所认识。 2实验部分 2．1仪器与试剂 甲醇、二氯甲烷(分析纯，北京化工厂)。普通厌氧培养基(GAM培养基)(日本日水公司)。乌头碱、次 乌头碱(中国药品生物制品检定所)。 2．2 16-O-去甲基去氧乌头碱在肠内细菌中的生物转化方法 mL 将3．23mg乌头碱用0．2mL乙腈溶解，加入到10GAM培养基中。然后加入0．2g健康成人的 r／min离心，二氯甲烷提取液 新鲜粪便，37℃厌氧培养。每间隔24h提取样品，二氯甲烷萃取，以3500 经0．45汕m微孔滤膜过滤，一20℃保存，备用。用LcQ—EsIMS“离子阱电喷雾质谱仪检测。 2．3质谱条件 毛细管温度：180℃；喷雾电压：5kV；离子透镜补偿电压：15V；碰撞能40％；氮气流速： 40 mL／min；检测质量范围：m屈100～1000；分辨宽度：2Da；注射泵流速：5斗L／min。 2007．03一14收稿；2007旬6一12接受 本文系国家自然科学基金(No30472134)和973中医理论专项(No．2006cB5047060)资助 $E—mail：syliul9@yahoo．com．cn 万方数据万方数据 1712 分析化学 第35卷 3结果与讨论 3．1 16-o-去甲基去氧乌头碱的结构确足 乌头生物碱类在电喷雾正离子模式质谱条件下形成质子化分子[M+H]+，通过质荷比和相关文献 数据可初步确定各离子峰的归属，通过串联质谱可进一步确定其结构1。乌头碱在肠内细菌中代谢前