Ca2+诱导的淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶分子的生物活性和结构变化.pdfVIP

V01．34 高等学校化学学报 No．11 2013年11月 CHEMICALJOURNAL0FCHINESEUNIVERSmES 2517～2523 doi：10．7503／cjc Ca2+诱导的淀粉液化芽孢杆菌理．淀粉酶分子的 生物活性和结构变化 冀旭，边六交 (西北大学生命科学学院，西安710069) 摘要在研究ca2+对淀粉液化芽孢杆菌理一淀粉酶分子生物活性影响的基础上，采用荧光光谱法和傅里叶变 换红外光谱法研究了ca2+诱导的酶分子结构变化．结果表明，当溶液中ca2+浓度低于25．0mmoL／L时，ca“ 对酶分子具有激活作用；而当ca2+浓度高于25．0mmoL／L时，ca2+对酶分子的生物活性具有抑制作用．在 Ca2+诱导的淀粉液化芽孢杆菌“一淀粉酶分子结构变化过程中，酶分子仅发生二级结构的变化，并不涉及其三 级结构．当ca2+对酶分子具有激活作用时，酶分子中的无规卷曲结构及JB·折叠结构的含量下降，而a-螺旋结 构及卢．转角结构的含量上升；而当ca2+对酶分子生物活性具有抑制作用时，酶分子中的a-螺旋结构及JB一转 角结构的含量下降，而无规卷曲结构及口一折叠结构的含量上升． 关键词 淀粉液化芽孢杆菌a．淀粉酶；ca“；生物活性；二级结构 中图分类号0629；Q518．4文献标志码A a一淀粉酶是一种内切水解酶，其主要作用是催化淀粉的1，4-d-D．葡聚糖生成还原性糊精和糖类， 在淀粉、清洁剂、饮料和纺织等领域具有重要作用。而细菌仅．淀粉酶，例如芽孢杆菌(曰oci朋w)和曲霉 属真菌(Asp田苫跏w)分泌的a一淀粉酶，是一种分子结构较为特殊的酶，酶分子中一般不含游离巯基，但 均含有二价金属钙离子¨J．尽管它们与依赖于氯离子的口一淀粉酶显示出较低的序列一致性，但这两类 形结构组成的c一端球形区域c这3个独特结构域构成旧J．例如，在地衣芽孢杆菌a一淀粉酶分子中，它 们的超级稳定性与桥连结构域A和B间的钙离子结合点间形成的钙．钠．钙金属三元基有关．与分子中 脱去钙离子的酶相比，该金属三元基区域显示出d一螺旋的松弛和由无序结构向有序结构的过渡”』． 二硫键的单链蛋白酶，每个酶分子内包含17个色氨酸和24个酪氨酸．Soderlund等Mo报道了这种酶基 因的核苷酸序列；灿ikhajeh等Ho测定了其晶体结构；Asgh撕等拍1研究了酸诱导的酶分子构象变化过 程并发现了一个折叠中间态；本课题组则研究了胍诱导的酶的去折叠过程并发现了一个折叠中间 态¨1．作为一种重要的稳定剂和调节剂，Ca2+对于发挥和调节a-淀粉酶分子的生物学功能具有至关重 要的作用．张学忠等旧1发现钙离子能够抗拒胍盐对酶分子构象的破坏；王俊英等一1研究了口-淀粉酶 BF 7658的稳定性，发现在溶液中添加钙离子能够提高酶的热稳定性；saboury等¨叫研究发现在淀粉液 化芽孢杆菌d．淀粉酶分子上有17个钙离子结合位点，钙离子的结合能够使酶更稳定且能防止酶生物 活性的自发减少；I(hajeh等¨u研究了附加钙离子在淀粉液化芽孢杆菌a一淀粉酶分子中的作用；Tanaka 和Hoshino通过失活动力学测定了淀粉液化芽孢杆菌d一淀粉酶分子的钙离子结合参数¨2{，并通过抑 制动力学测定了它们的二级钙离子结合参数¨3|；而Kumari等¨4o通过测定钙离子饱和以及去掉钙离子 的地衣芽孢杆菌、米曲霉和猪胰腺a一淀粉酶分子的热展开动力学，研究了钙离子对这3种酶分子的稳 定作用．文献[15～17]结果表明，钙离子对淀粉酶的活性具有不同程度的抑制作用；而Dunn等¨副发 现钙离子能提高来源于3种细菌的淀粉酶的活力；陆得漳等¨纠研究了钙离子对米曲霉d一淀粉酶活力 收稿日期：2013_03—12． 基金项目：国家自然科学基金(批准号资助． 联系人简介：边六交，男，博士，教授，博士生导师，主要从事蛋白质分子的分离纯化及结构研究．E．mail：bianlⅫim@”hu．com 万方数据