副溶血弧菌生物膜相关基因突变株的构建.pdfVIP

史堡蔓随医堂苤圭!!!!生!旦箜!!鲞筮!塑些i!』里堡!丛型：丛!Y!!!!：∑!!：堡!：盟!：! 439· ．实验研究． 副溶血弧菌生物膜相关基因突变株的构建 李迎丽 张义全 闫小娟 刘梦颖 杨瑞馥邱景富 周冬生 【摘要】 目的构建副溶血弧菌生物膜相关基因突变株并进行验证。方法 采用PCR方法扩 增得到靶基因的上下游同源臂片段，然后以上下游同源臂片段为模板，PCR扩增得到同源臂融合片 段。将同源臂融合片段经酶切处理后克隆到自杀质粒pDSl32中。通过结合转移的方式将携带有同 源臂融合片段的重组质粒转入副溶血弧菌RIMD 2210633中，利用同源重组得到突变株。用PCR方 法筛选和鉴定突变株，同时对突变株进行表型分析，从而在分子水平和表型试验上验证突变株是否构 建成功。结果 构建得到了分别携带副溶血弧菌生物膜相关基因”÷皿、crp、hns、swrZ、swrT、cpsR融合 同源臂片段的重组质粒，通过PCR扩增，分别得到了大小为1190、1128、1136、953、1242、1112 bp的片 段；用重组质粒构建了相应的突变株(AvbfR、Acrp、Ahns、AswrZ、AswrT和AcpsR)，进行PCR鉴定时， 突变株得到了大小分别为1190、1128、1136、953、1242、1112 bp的扩增产物，比阳性对照分别小 610、739、421、542、427、1367bp；用靶基因内部的引物进行扩增时，无扩增产物；选其中一株突变株 Ahns进行生物膜形成能力表型分析，结果表明突变株Ahns生物膜形成量与野生株相比明显增加。 结论构建得到了6株副溶血弧菌生物膜相关基因突变株，并从分子和表型试验上验证了突变株构 建正确： 【关键词】 弧菌属；质粒；生物膜；基因敲除技术； 突变 ConstructionofbiofilmformationrelatedmutantsinVibrio LI parahaemo如ffcHsYing—li+．ZHANG 1 SchoolPublic Jing-fu，ZHOU of Yi-quan，Y4NXia00unn．uUMeng—ying，YANGRui尊，QIU Dong—sheng Healthand Medical University，Chongqing400016，China Management，Chongqing author：ZHOU corn Corresponding Dong—sheng．Email：dongshengzhoul977@gmaiL Toconstructthemutantsofbiofilmrelated inVibrio Objective 【Abstract】 genes parahaemolyticus andcon6rnlthemutants．MethodsThe anddownstream of homologousupstream flankingfragmentstarget were PCR，an