大鼠组胺（HIS）酶联免疫检测.doc

大鼠组胺(HIS)酶联免疫检测 试剂盒使用说明书 使用前阅读。酶联免疫试剂盒是基于夹心只能用于研究用途不得用于医学诊断。用途： 用于 工作原理是夹心酶联免疫吸附法ELISA）测定预先包被克隆抗体，并在酸的作用下转化成最终的黄色。呈正相关 1 标准ng/ml） 0.5ml 7 显色剂A液 6ml 2 标准品稀释液酶板-HRP 6ml 10 说明书 1份 5 30倍浓缩洗涤液 20ml 11 封板膜 2张 6 生物素标记的抗- HIS抗体 1ml 12 密封袋 1个 需要而未提供的试剂和器材 ℃恒温箱。 标准规格酶标仪。 一次性试管注意事项 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和。洗板方法 手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将洗涤液至少ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中-20℃保存，但应避免反复冻融操作程序ng/ml （5号标准品） 120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液 60ng/ml （4号标准品） 120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液 30ng/ml （3号标准品） 120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液 15ng/ml （2号标准品） 120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液 7.5ng/ml （1号标准品） 120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 加样：1）空白孔：空白对照孔不加样品，生物素标记的抗HIS抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂AB和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50μl，链霉素-HRP50μl（标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加）；3)待测样品孔:加入样本40μl，然后各加入抗- HIS抗体10μl、链酶亲和素-HRP50μl，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60分钟。 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。 终止：每孔加终止液50μl，终止反应。450nm波长依序测量各孔的度（OD值）根据样品的值在上对应的浓度。也可以使用各种应用软件来计算。 准备试剂，样品和标准品 加入准备好的样品和标准品，生物素标记二抗和酶标试剂，37℃反应60分钟 洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色10分钟 加入终止液 10分钟之内读OD值 计算 检测范围：ng/ml→200ng/ml。保存： 有效期： 个月（）。