基于胸腺嘧啶汞离子胸腺嘧啶结构和纳米金放大传感器检测汞离子_临床医学论文.docVIP

基于胸腺嘧啶汞离子胸腺嘧啶结构和纳米金放大传感器检测汞离子_临床医学论文 基于胸腺嘧啶汞离子胸腺嘧啶结构和纳米金放大传感器检测汞离子_临床医学论文 作者：莫志宏 杨琳玲 杨小超 陈自锋 【摘要】 利用Hg2+与DNA中胸腺嘧啶(T)结合的高度特异性和纳米金在石英晶体微天平(QCM)上的信号放大作用，设计了一种简便灵敏的Hg2+检测方法。纳米金采用柠檬酸钠还原法制备，其表面用末端带巯基的寡核苷酸探针进行自组装修饰，并用6巯基己醇(MCH)部分取代表面探针，以减少杂交空间位阻。结果表明，寡核苷酸链长为9bp、T个数为7的序列具有较高灵敏度；线性范围为5.0～100 nmol/L；检出限为2.0 nmol/L；Ca2+、Mg2+等其它金属离子无明显干扰。用于环境水样中Hg2+的测定, RSDlt;2.9%；加标回收率为97.3%～101.2%。 【关键词】 汞离子，寡核苷酸，纳米金，石英晶体微天平 　　Abstract A simple and sensitive method was developed for the detection of mercury ions with quartz crystal microbalance(QCM), based on the specific thymine(T)Hg2+T structure and gold nanoparticles. The gold nanoparticles were prepared by the citrate reduction method. In a selfassembled way, the particle surface was modified with the probe oligonucleotides which were partially replaced by 6Mercaptohexan1ol to reduce the steric hindrance of hybridization. The sensitivity was optimized by the oligonucleotide with a strand length of 9bp and a T number of 7. The linear range was 5.0－100 nmol/L with a detection limit of 2.0 nmol/L. And Ca2+, Mg2+ and other metal ions had no significant interferences. This method was successfully applied for the detection of Hg2+in environmental water samples, with RSD less than 2.9% and recoveries of 97.3%－101.2%. 　　Keywords Mercury ion, oligonucleotide, gold nanoparticle, quartz crystal microbalance 　　1 引 言 汞对人体健康危害严重[1,2]，是水环境监测的重要指标。环境水样中Hg2+的测定主要采用等离子体原子发射光谱法和质谱法[2,3]、荧光法[4,5]和电化学法[6,7]等。目前,这些方法或需要昂贵的仪器，不适合现场分析；或灵敏度和选择性不能满足环境监测要求，需要进行分离富集，操作繁琐费时。研究发现，Hg2+能介导胸腺嘧啶(T)配对，形成稳定的T特异性结构[8]；并由此研究了具有良好选择性的Hg2+检测方法，包括荧光猝灭[9]、纳米金凝聚比色[10～13]等。但上述方法的灵敏度还有待进一步提高。石英晶体微天平（QCM）是一种基于压电效应的高灵敏质量传感器（灵敏度可达ng级），装置简单，使用方便，已广泛应用于生物化学传感检测[14]。文献报道采用聚噻吩[15]和黑色素[16]修饰QCM金电极来实现对Hg2+的检测，灵敏度高，但特异性较差。本研究利用Hg2+与T结合的高度特异性和纳米金在QCM上的信号放大作用，如图1所示，设计出富含T的寡核苷酸序列A与B，分别修饰在QCM金电极和纳米金表面；只有当溶液中存在Hg2+时，A与B才能通过Hg2+的介导配对杂交；此时QCM电极表面质量发生明显变化，从而建立了灵敏、特异的检测Hg2+的方法。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 UV型紫外可见分光光度计(日本Shimadzu公司)；TECRAI型透射式电子显微镜(荷兰Philips公司)；PSC2UD01压电芯片与EXCE100压电传感实时分析仪(重庆大学微系统研究