基质金属蛋白酶2及其抑制因子TIMP2在脑胶质瘤中的表达及意义_临床医学论文.docVIP

基质金属蛋白酶及其抑制因子TIMP在脑胶质瘤中的表达及意义_临床医学论文 基质金属蛋白酶及其抑制因子TIMP在脑胶质瘤中的表达及意义_临床医学论文 作者：周任，柏鲁宁，王睿智，张龙洲，包新杰，曹杰 【摘要】 　　目的 探讨基质金属蛋白酶及其抑制因子TIMP的表达及其与脑胶质瘤恶性程度之间的关系。方法 采用免疫组化SP法检测并比较了67例不同级别胶质瘤组织和10例正常脑组织中MMP和TIMP蛋白的表达情况。结果 随着肿瘤恶性程度的增加，MMP蛋白表达增高而TIMP蛋白表达降低。结论 MMP及TIMP对胶质瘤恶性程度的评估有重要的意义。 【关键词】 基质金属蛋白酶；基质金属蛋白酶抑制因子；神经胶质瘤 　　ABSTRACT: Objective To explore the expression of matrix metalloproteinasehods Immunohistochemical SP method was employed to examine the level of MMP2 and TIMP2 in surgical samples from 67 patients suffering from gliomas and 10 patients with cerebral trauma. Results As the tumors malignancy degree increased, the expression of MMP2 increased but the expression of TIMP2 decreased as the tumor malignancy degree increased. Conclusion MMP2 and TIMP2 have a great significance in evaluating the malignancy degree of human gliomas. 　　KEY WORDS: matrix metalloproteinasestissue inhibitor of metalloproteinase2 (TIMP2); glioma 　　人脑胶质瘤是危害人类健康的常见恶性肿瘤，约占颅内肿瘤的40%-50%。目前，以手术治疗为主辅以放疗、化疗的综合治疗总体疗效欠佳，而造成这一现象的一个重要原因就是胶质瘤所具有的侵袭性生长特性[1]。 　　目前，认为在脑胶质瘤侵袭性生长过程中，起关键作用的是一类基质金属蛋白酶(matrix。MMPs在人体内表达的水平及其活性受诸多因子的调节，特别与其特异性组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase, TIMPs)关系密切，可以说MMPs与TIMPs在人脑胶质瘤中表达情况直接关系到胶质瘤侵袭性的强弱。本研究采用免疫组化的方法，检测了人脑胶质瘤中MMP和TIMP蛋白表达情况，并探讨其与胶质瘤恶性程度之间的关系。 　　1 资料与方法 　　1.1 临床资料 　　本组67例神经胶质瘤标本均为2004年至2006年我院手术切除的石蜡包埋标本(观察组)。其中男40例，女27例；年龄20-69岁，平均(43.07±7.23)岁。患者术前均未行放、化疗。全部脑胶质瘤组织均经病理组织学检查明确诊断。根据WHO分级和分类标准[2]：Ⅰ级17例，Ⅱ级10例，Ⅲ级22例，Ⅳ级18例。同期收集10例脑挫裂伤开颅减压者的正常脑组织作为对照(对照组)。 　　1.2 主要试剂与仪器 　　鼠抗人MMP2、TIMP一抗均购自Maixinbio公司；SP免疫组化试剂盒、DAB显色剂、多聚赖氨酸等购自武汉博士得生物公司；主要仪器有水浴锅、微波炉、显微镜等。 　　1.3 MMP、TIMP蛋白的检测 　　采用免疫组化SP法。肿瘤标本常规二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水后以3%(体积分数)H2O2、37℃孵育10min，PBS冲洗2-3次各5min；然后将标本置于0.01mol/L枸橼酸缓冲液中行抗原修复，在正常羊血清工作液封闭10min后倾去血清，滴加鼠抗人MMP和TIMP一抗，4℃冰箱孵育过夜；PBS冲洗5min后滴加生物素标记二抗，孵育30min后以PBS冲洗；最后滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS冲洗3次各5min，DAB反应显色后自来水充分冲洗、苏木素复染。常规行脱水、透明、干燥封片后镜下观察。用已知MMP、TIMP表达阳性的切片作阳性对照，PBS代替一抗孵育已知阳性的切片作阴性对照。 　　1.4 结果判定标准 　　MMP和TIMP蛋白染色主要位于胞质，极少数有胞核着色，光镜下呈棕黄或棕褐色。每张切片高倍镜下(×400)随机观察5个视野，对染色阳性细胞