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基于HEV中和表位的基因免疫诱导特异性抗体及中和作用研究_临床医学论文 基于HEV中和表位的基因免疫诱导特异性抗体及中和作用研究_临床医学论文 作者：王春玲,杨书才,孟继鸿,王立新 【摘要】 　　目的：观察基于戊型肝炎病毒中和表位(p179)的基因免疫是否能在小鼠体内诱导具有中和作用的抗体应答。方法：构建含HEV中和表位p179编码基因的真核表达质粒pVAX以肌肉注射法对BALB/c小鼠实施基因免疫，实验组每只小鼠给pVAX并设立空质粒pVAX和HEV蛋白两个对照组。定期采集小鼠血清,ELISA法检测其特异性抗HEV抗体及其亲合力；以基于PCR的体外中和实验检测抗体的中和活性。结果：pVAX质粒基因免疫诱导小鼠体内产生了特异性抗抗体,抗体水平于第10周达高峰,OD值为0.55±0.13,与空质粒pVAX组(0.15±0.07)比较差异有统计学意义(P＜0.001)。第6周实验组抗体亲合力(ED50为2.5 mol·L-1)高于蛋白对照组（ED50为2.0 mol·L-1),基因免疫促进了抗体亲合力的成熟；体外中和实验证实产生的特异性抗体能够阻止HEV感染人肝癌细胞7721,具有中和HEV的活性。结论：基于戊型肝炎病毒中和表位(p179)的基因疫苗pVAX能够在小鼠体内诱导产生具有中和作用的抗体应答。 【关键词】 戊型肝炎病毒； 中和表位； 基因疫苗； 抗体应答； 中和作用 　　［Abstract］ Objective：To investigate whether the DNA vaccine based on HEV neutralization epitope(s) HEVhods：The neutralization epitope(s) HEValization assay.Results:Immunizations with pVAX179 successfully induced antiHEV specific antibody response and accelerated the avidity maturation of antibodies.The antiHEV level reached the hightest values about 10 weeks after first vaccination.The avidity of antibodies from pVAX179 immunized mice was higher than that from HEVp179 protein immunized group.In addition,the postimmune sera obtained from pVAXp179 vaccinated mice were found the protective neutralizing activity against HEV infection.Conclusion：These results indicate that the DNA vaccine based on HEV neutralization epitope(s)． 　　［Key word］ hepatitis E virus； neutralization epitope； DNA vaccine； antibody response； neutralizing activity 　　戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是无包膜的单正链RNA病毒,主要通过胃肠道传播,是引发急性戊型肝炎(hepatitis E,HE)的病原体。目前HE尚无特效的抗病毒治疗药物,因此,HEV疫苗的研制受到人们的重视。HEV疫苗的关键是能否诱导具有保护作用的中和抗体［1-2］,而中和抗体的诱导必须基于中和抗原表位。 　　在以往的研究中我们发现,来源于HEV编码衣壳蛋白C端(第439～617位氨基酸)的p179多肽是能在真核细胞有效表达的、含有中和抗原表位的最短多肽［4］,这为研制基于中和表位的HEV基因疫苗奠定了物质基础。 　　在本研究中,我们以pVAX为真核表达载体、HEV～617(p179)为靶基因构建重组质粒pVAX以肌肉注射法对Balb/c小鼠实施基因免疫,观察该基因疫苗在小鼠体内诱导的HEV特异性抗体及其中和作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 质粒和主要试剂 　　真核表达载体pVAX由复旦大学熊思东教授惠赠,PCR产物纯化试剂盒Plasmid Mega Kit购自QIAGEN公司,纯化HEV［3］、HEV蛋白由本室自制,HRP标记羊抗小鼠IgG抗体购自Sigma公司,0.75%布比卡因和戊巴比妥钠购自上海禾丰制药有限公司,