声长对小鼠下丘神经元声强反应关系的影响_临床医学论文.docVIP

声长对小鼠下丘神经元声强反应关系的影响_临床医学论文 声长对小鼠下丘神经元声强反应关系的影响_临床医学论文 作者：杨晓丽 从文东 王晓 肖中举 【摘要】 目的： 探讨声长（sound duration）对听神经元声音强度反应关系的影响。方法： 采用在体细胞外记录方法，通过给予双耳不同声长和声强的特征频率（characteristic frequency, CF）短纯音刺激，记录4～6周BALB/c小鼠下丘神经元听反应，并分别以动作电位发放数（spike counts，SC）和第一发放延时（first spike latency，FSL）为评价指标，分析比较声长对神经元的声强反应关系的影响。 结果： 共记录到35个神经元反应。以发放数为评价指标，这些神经元分别表现出34％单调、26％饱和、40％非单调3种声强反应。较之发放数, FSL能更好地反映声强和声强变化，并展示出同一规律的FSL声强反应曲线：FSL随着声强的增大而缩短。在不同声长下，所有神经元发放数声强曲线和FSL声强曲线基本重合，但后者变异性小。结论： 声长对小鼠下丘神经元强度反应关系无明显影响；相比发放数，FSL则能更准确地反映声强和声强变化。 【关键词】 第一发放延时； 声长； 小鼠； 下丘 在感觉系统对外界信息编码的研究领域里，动作电位发放数/率（spike counts/rate, SC）一直是被广泛采用的反应参数［1～4］。不过，近年来已有不少研究工作者认为动作电位的时间特性可能作为信息载体发挥了更大的作用，并已在听觉、视觉、躯体感觉系统中被证实［5～10］。而且，动作电位发放时间，尤其是第一个动作电位延时（first spike latency,　FSL），较之动作电位发放数/率，携带了更多更精确的感觉信息［4，11～12］。但听觉系统研究中，FSL却受着多种因素的影响，如声强、频率、声刺激的前后信息等［11］。虽说有人认为声长可能影响神经元反应阈值而影响FSL［13］，但却没有实验依据。本实验室前期研究工作虽已经证明了较之SC、FSL更加精确和稳定，能更好地表征刺激声音幅度，但仅限于固定在某一声长下［4］。由于声长同样可以影响SC和FSL［14～16］，但是否声长可改变神经元对声强的反应关系尚无研究。因此，本实验在改变声刺激强度的同时也改变声长，比较并分析声长对小鼠下丘神经元SC声强和FSL声强曲线的影响，以期更一步阐明SC和FSL编码声刺激参数的准确性以及声长对它们的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　实验动物为4～6周龄无听觉障碍BALB/c小鼠，重约9～20g，雌雄不拘，由南方医科大学实验动物中心提供，等级为SPF级。所有实验过程均在南方医科大学动物保护和使用管理委员会的批准和监督下进行。 　　1.2 手术步骤 　　称重后，先给予小鼠腹腔注射阿托品（atropine sulfate，0.25 mg/kg）以减少呼吸道分泌物，然后腹腔注射戊巴比妥钠（sodium pentobarbital，60～70 mg/kg）进行麻醉。待小鼠进入麻醉状态，头皮下注射利多卡因局部麻醉后，再去除头部部分皮肤，清理干净头骨部组织，并将一长约1.5 cm 的平头金属钉垂直粘在头骨表面。而后，将动物置入一泡沫塑料制成的模子中用弹性胶带固定好，并悬吊于防震台上的一个固定支架上。动物头部正对前方30 cm处喇叭，并以平头金属钉固定在一垂直杆上。在手术显微镜下，用钻头在一侧下丘上方开一大约2×2 mm2大小的窗，充分暴露下丘。实验记录过程在无回响、恒温（24～26 ℃）的屏蔽室内进行。实验中使动物保持浅麻醉状态，即存在耳廓反应，但对痛刺激不引起腿部收缩。记录中通过数码摄像头观察动物，当发现有异动或钳刺激引起腿部收缩时即皮下补麻醉剂（15 mg/kg），或正常情况下每小时给该剂量药物维持状态。 　　1.3 声音刺激与数据采集 　　声音刺激与数据采集通过Tucker系统3（TDT 3, Alachua, Florida, USA）完成。实验采用自由声场给声。实验开始用50 ms的噪音刺激探查神经元反应，再以50 ms短纯音刺激确定其特征频率（characteristic frequency, CF， 最小阈值时的声刺激频率）和最小域值（minimum threshold, MT，特征频率下诱发的0.1发放率的最小声强）。给声速率为1 Hz。之后，将短纯音频率设为神经元的CF，声长为5、10、20、50、100、160、320、640、720 ms（不包括上升和下降时间各5 ms），同时幅度以10～20 dB或1～3 dB（接近MT时）在90 dB SPL至最小域值下10 dB间变化。每个声音刺激随机重复15次。 　　记录电极尖端直径约1 μm，阻