壳聚糖对白血病细胞糖基转移酶表达的影响及对细胞的抑制作用_临床医学论文.docVIP

壳聚糖对白血病细胞糖基转移酶表达的影响及对细胞的抑制作用_临床医学论文 壳聚糖对白血病细胞糖基转移酶表达的影响及对细胞的抑制作用_临床医学论文 【摘要】 目的： 观察壳聚糖对白血病细胞（K562,SHI）的作用。方法： 以不同浓度的壳聚糖处理白血病细胞K562后，运用RT方法检测实验组K562细胞中多肽：N乙酰氨基半乳糖转移酶（ppGalNAc）mRNA表达差异。另用不同浓度的壳聚糖分别作用于白血病K562细胞和SHI细胞，MTT法检测壳聚糖对两种细胞的相对抑制率。结果： 与阴性对照组比较，实验组K562细胞的ppGalNAc表达降低，且随壳聚糖浓度升高，表达量进一步减少；MTT实验显示不同浓度的壳聚糖对K562细胞和SHI细胞均有抑制作用，并呈浓度依赖性。结论： 壳聚糖对肿瘤细胞有一定的抑制作用，同时还可以减少ppGalNAc在mRNA水平的表达。 【关键词】 多肽：N乙酰氨基半乳糖转移酶； 壳聚糖； RT； 白血病细胞 　　［Abstract］ Objective: To observe the effect of chitosan on leukemia cells(K562,SHI： The leukemia cells were treated by different concentration of chitosan. The expression of ppGalNAc， and the relative inhibition rate was determined by MTT assay. Results： With adding the chitosan to compare with the negative group, the expression of ppGalNAcitosan with various concentrations had the inhibitory action on the K562 cells and the SHI1 cells. Conclusion： The chitosan suppressed the K562 cells and the SHInced the expression of ppGalNAcT2 in leukemia cell K562 reduced its expression quantity. 　　［Key words］ ppGalNAc 　　壳聚糖［化学名：β（1，4）乙酰葡萄糖胺］是甲壳素（chitin）经脱乙酰化得到的产物，又名甲壳胺、脱乙酰壳多糖等，是天然多糖中唯一的碱性多糖，具有良好的生物相容性和生物可降解性，在体内能被溶菌酶等降解，降解产物能完全被人体吸收，无毒副作用［1］。近年研究表明壳聚糖及其衍生物有抗肿瘤和增强机体免疫功能作用。杜昱光等［2］发现壳寡糖在体外可抑制肝癌、宫颈癌、白血病和S180腹水癌等多种癌细胞的生长，并抑制肿瘤细胞的DNA合成，在体内壳寡糖可抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，并延长其生存期。本实验以慢性髓源性白血病细胞K562的多肽：N乙酰氨基半乳糖转移酶（ploypeptide：N，ppGalNAc）作为研究对象，对不同浓度壳聚糖作用48 h后的白血病细胞ppGalNAc的mRNA表达变化进行探索，同时利用MTT法检测壳聚糖对K562和急性单核细胞白血病细胞SHI的相对抑制率，为壳聚糖作为抗肿瘤辅助药物提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材 料 　　壳聚糖胶囊由中科院大连化学物理研究所馈赠，RPMI培养基为美国Gibco产品，Taq DNA聚合酶,dNTP MIX为MBI公司产品，MTT购自Sigma公司，PCR仪为美国MJ产品，酶联免疫检测仪为Bio产品。 　　1.2 壳聚糖的配制 　　从壳聚糖胶囊中获得壳聚糖，用无血清培养基配成相应浓度。 　　1.3 细胞的培养与处理 　　白血病细胞SHI由苏州大学附属第一人民医院血液研究所提供，K562细胞由本教研室复苏后常规培养（37℃,5% CO2)。细胞生长至对数生长期，分为4组，使壳聚糖浓度分别为0，50，100，200 μg/ml。常规培养48 h后收集细胞。 　　1.4 总RNA的制备与鉴定 　　细胞总RNA的提取采用 Trizol一步法［3］。用752紫外分光光度计分别于260 nm和280 nm处测量D值。以D（260 nm)与D(280 nm)的比值确定RNA的纯度，以D(260 nm)值确定RNA的量并稀释到终浓度为1 μg/ml。 　　1 μl样品RNA含量=D(260 nm)×40 μg/ml×稀释倍数 　　1.5 RT反应（两步法）检测ppGalNAc表达 　　1.5.1 反转录cDNA反应体系