壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基化作用的影响_临床医学论文.docVIP

壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基化作用的影响_临床医学论文 壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基化作用的影响_临床医学论文 作者：沈力， 闫 石， 吴祁生， 吴士良 【摘要】 目的： 观察中药壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基转移酶表达的影响,探讨中药多糖在肿瘤预防和治疗的应用。方法： 以浓度为50,100和200 mg/L的壳聚糖分别作用于肝癌细胞株SMMC和肺癌细胞株A549,采用RT方法检测多肽：N乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAcT2）和β3GalT7的表达水平。 结果： 肝癌细胞株中ppGalNAcT2和β3GalT7仅微弱表达,加药后作用不明显；肺癌细胞株中ppGalNAcT2和β3GalT7均有所表达，加入不同浓度的壳聚糖之后，ppGalNAcT2和β3GalT7的表达均受到抑制，且随着壳聚糖浓度的增加，抑制作用越明显。结论： 肝癌细胞株SMMC和肺癌细胞株A549 ppGalNAcT2和β3GalT7的表达不同，壳聚糖能够抑制肺癌细胞株A549中的糖基转移酶ppGalNAcT2和β3GalT7的表达，从而抑制了糖基化作用，对肺癌的预防和治疗具有一定的价值。 【关键词】 壳聚糖； 肝癌； 肺癌； 糖基转移酶 ［Abstract］ Objective: To observe the effect of chitosan to the expression of different glycosyltransferases in liver cancer cell line and lung cancer cell line and to study the application of chitosan in preservation and treatment of tumor. Methods： Detect the expression of ppGalNAcT2 and β3GalT7 in SMMC，100，200 mg/L. Results： The mRNA expression of ppGalNAcT2 and β3GalT7 was in low lever in SMMC： This study showed that the expression of ppGalNAcT2 and β3GalT7 in SMMCion and treatment of lung tumor. ［Key words］ chitosan；liver cancer; lung cancer；glycosyltransferase 中药多糖广泛存在于植物、微生物(细菌和真菌)和海藻中,具有极大的医学应用价值。壳聚糖是采用甲壳素作为原料, 通过脱乙酰后制成的一种天然生物高分子, 是生物界大量存在的线性氨基多糖,具有广泛的药理作用，譬如抑菌作用，调脂及调节血糖作用，抗凝血作用等等。近年来有文献报道壳聚糖具有极佳的抗肿瘤作用，并且无毒副作用［1］。 肿瘤细胞糖蛋白糖链结构异常与肿瘤的生物学行为,如恶性转化、转移与浸润等密切相关,而其基础是糖基转移酶的变化。因此,研究肿瘤细胞的糖基转移酶变化,有助于了解肿瘤的生物学行为机制,利于肿瘤的治疗和预防。本文观察了不同浓度壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基转移酶表达差异,以探讨糖基转移酶与肿瘤细胞浸润转移能力的关系,以及壳聚糖在肿瘤治疗和预防中的作用。 1 材料和方法 1.1 试 剂 Trizol，M逆转录酶,dNTP MIX, 5×M缓冲液，10×PCR 缓冲液，MgCl2等均购自Invitrogen 公司，六碱基随机引物购自TaKaRa 公司，TaqDNA 酶购自上海捷瑞生物科技有限公司。 1.2 细胞培养及分组 肝癌细胞株SMMC和肺癌细胞株A549均为本室保存。壳聚糖胶囊由中科院大连化学物理研究所提供,溶于无血清的RPMI培养基,0.22 mm孔径的滤膜过滤除菌,4℃放置备用。 SMMC和A549用含10％小牛血清的RPMI培养基，置37℃，5％CO2培养箱内培养，生长至对数生长期时进行细胞分组。细胞分成4组，第1组，即对照组，加入1 ml的培养基；第2组，加入等体积50 mg/L的壳聚糖；第3组，加入等体积的100 mg/L的壳聚糖；第4组，加入等体积的200 mg/L的壳聚糖。然后加入相同体积的培养基继续培养24 h。 1.3 RT RTPCR法检测SMMC和A549细胞中ppGalNAcT2，β3GalT7的表达：将培养瓶中的细胞用PBS洗2次, 1 500 r/min离心5 min后弃上清,保留细胞,Trizol法提取总RNA。取总RNA 2 μg进行逆转录反应,再进行PCR扩增。扩增产物以2%的琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,图像分析仪摄像并分析结果。PC