实验方案采用篇.docVIP

良肤乳膏各成分的透皮特性研究 良肤乳膏各成分的理化性质研究:溶解性能，分配性能，解离性能（已完成） 良肤乳膏中各成分的检测方法的建立 1、良肤乳膏中个单一成分的HPLC条件的建立： 丹皮酚 色谱条件为甲醇：水（45:55），十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，C18柱，流速为1ml/min检测波长为244nm(药典条件)。 对照品的制备：称取适量的丹皮酚对照品于50ml容量瓶中，用甲醇溶解，制成20μg/ml的对照品溶液。 供试品的制备：取丹皮酚提取物适量于50ml容量瓶中，用甲醇溶解，制成一定浓度的供试品溶液。 梣酮，以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇：水（60:40）为流动相，检测波长为236nm，理论塔板数按梣酮峰计算不得低于3000； 对照品的制备：称取适量的梣酮对照品于50ml容量瓶中，用甲醇溶解，制成60μg/ml的溶液即得。 供试品的制备：取白鲜皮提取物适量于50ml容量瓶中，用甲醇溶解，制成一定浓度的供试品溶液 白鲜碱：以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇：水（52:48）为流动相，检测波长为220nm，柱温30℃ 对照品的制备：精密称取白鲜碱对照品适量于50ml容量瓶中，加甲醇制成 供试品的制备：取白鲜皮提取物适量于50ml容量瓶中，用甲醇溶解，制成一定浓度的供试品溶液 甘草次酸：以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，流动相为乙腈：0.05%磷酸水梯度洗脱，检测波长234nm，理论塔板数按照 对照品的制备：精密称取甘草次酸对照品适量于50ml容量瓶中，加甲醇溶解制成 供试品的制备：取甘草提取物适量于50ml容量瓶中，用甲醇溶解，制成一定浓度的供试品溶液 在经过良肤乳膏各成分的透皮特性实验后，将会根据实验数据，将良肤乳膏的各成分作拆方组合处理，采用数理统计的方法，对组合后的方案进行方法学考察以及相互影响的验证试验。 2、标准曲线的绘制：分别配制五个不同浓度的丹皮酚（梣酮，白鲜碱，甘草次酸）的对照品溶液，进行液相分析，根据实验数据绘制标准曲线。 3、线性范围的考察： 精密配制一系列浓度的丹皮酚、白鲜碱、梣酮及甘草次酸对照品溶液，按色谱条件进样分析，将各对照品溶液的浓度C与峰面积A进行线性拟合， 4、方法回收率 精密吸取6份已知含量的丹皮酚、白鲜碱、梣酮、甘草次酸供试品1ml，分别精密加入一定量的丹皮酚、白鲜碱、梣酮、甘草次酸对照品，按供试品溶液的制备及上述色谱条件操作，计算回收率。 回收率%=（C-A）/B×100% 式中 A为供试品所含被测成分量； B为加入对照品量； C为实测值。 5、精密度试验： 粗密吸取丹皮酚、梣酮、白鲜碱、甘草次酸对照品溶液20μl，重复进样5次，测定丹皮酚、梣酮、白鲜碱、甘草次酸的峰面积，计算RSD（精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差的相对标准偏差表示。 三、透皮实验 1、实验动物皮肤的选择（猪皮，有毛大小鼠皮肤，裸鼠皮肤，蛇皮，尸皮，病变皮肤,人造皮肤，人工膜） 1.1实验动物皮肤的制备: 小鼠，用眼科剪剪去腹部的毛，脱颈椎处死，取腹皮，置于玻璃平板上，除去粘连物与脂肪组织，用双蒸水洗净，浸泡在生理盐水中，置于4度冰箱中保存备用。 大鼠：脱颈椎处死，用眼科剪将腹部的毛剪短，用自制的脱毛剂涂抹于短毛处，待一段时间后，用温水将脱毛膏洗去，用干纱布或棉花将皮肤擦净，取腹部皮肤，置于玻璃平板上取出皮下脂肪组织与粘连物，用双蒸水洗净，置于生理盐水中，于4度冰箱中冷藏备用。 猪皮：将市售的猪皮用双蒸水洗净，用拔毛法将皮肤表面的猪毛除去，将皮下脂肪层与粘连物去除，置于生理盐水中，放置在4度冰箱中保存备用。 蛇皮：洗净，置于生理盐水4度环境下备用。 1.2实验皮肤的完整性考察 应用光镜对皮肤进行观察，看其皮肤表面是否有破损。（方法一） 用一种已知透皮速率的药物，对皮肤的完整性进行检查试验。（方法二） 是否还有更好的完整性考察 1.3透皮比较实验 将处理好的各种完整的无破损的皮肤取出，角质层面向供给池，真皮层面向接收池，将皮肤夹紧在Franz扩散池，在供给池中加入1ml的丹皮酚溶液作为供给液，接收此中则加入5ml40%的乙醇生理盐水作为接收液，在Franze扩散池进行试验，以透皮速率，皮肤滞留量，累计渗透量，时滞，渗透速率作为指标，对实验数据进行分析，对所选皮肤的相似程度进行比较选择。 2、透皮实验各参数的选择 筛选出与人体皮肤最为相似的皮肤模型之后，则要对透皮实验时所涉及到的一些试验参数进行考察选择： 2、1扩散池转速的确定：预选定四个转速进行试验，100转，120转，200转，,300转分别在透皮两小时后取点，分