大鼠酒精性肝损伤中PPARα mRNA表达与氧化应激的关系_临床医学论文.docVIP

大鼠酒精性肝损伤中PPAR表达与氧化应激的关系_临床医学论文 大鼠酒精性肝损伤中PPAR表达与氧化应激的关系_临床医学论文 【摘要】 目的 观察大鼠酒精性肝损伤肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体表达变化与氧化应激的关系，探讨PPAR在酒精性肝损伤中的作用。方法 将60只Wistar大鼠随机分为5组：对照组1组、观察组4组（包括4、8、12、 16 w组）。采用白酒灌胃法复制酒精性肝损伤动物模型，分别于开始造模后的第4、8、12、16周时处死各组动物，检测肝组织中PPAR的表达、血清游离脂肪酸(FFA)水平、肝组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力，并分析PPAR的表达与FFA水平、MDA含量、SOD活力之间的相关性。结果 与对照组比较，各观察组大鼠PPAR的表达受抑制；随造模时间延长，其表达水平呈进行性降低，特别是在12、16 w时更为明显（P＜0.01）；血清FFA水平、肝组织中MDA含量明显增加，随造模时间延长更为明显（P＜0.01,P＜0.05）；肝组织中SOD活力明显下降，随造模时间延长更为明显（P＜0.01）。且PPAR表达与血清FFA水平、肝组织中MDA含量之间呈负相关(P＜0.05)，与肝组织中SOD活力呈正相关(P＜0.05)。结论 PPAR表达与氧化应激关系密切，在酒精性肝损伤进程中具有重要作用。 【关键词】 过氧化物酶体增殖物激活受体；氧化应激；酒精性肝损伤 过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARs）是一类由配体激活的核转录因子，活化后可以调控多种核内靶基因的表达，具有多种生物学效应〔1〕。研究发现，作为PPARs 亚型之一，PPAR具有调节脂肪代谢、炎症反应、免疫功能、细胞分化等作用，与诸多肝脏疾病的发生、发展关系密切。笔者已研究证实，PPAR表达与核因子(NF)、肿瘤坏死因子(TNF)、白介素(IL)等多种炎性细胞因子关系密切，在酒精性肝损伤炎症反应中具有重要作用〔2〕。本实验将从PPAR表达与氧化应激的关系入手，进一步探讨PPAR的表达在酒精性肝损伤发病机制中的作用。 1 材料与方法 1.1 实验动物分组 健康Wistar大鼠60只，雌雄各半，随机分为5组：对照组1组，观察组4组，每组12只。根据造模时间的不同，观察组分为4、8、12、16 w组。实验期间各组大鼠均予以饮用水及全价营养颗粒饲料喂养。 1.2 动物模型建立 大鼠经适应性喂养1 w后，观察组参照相关文献造模〔3〕：用红星牌二锅头白酒（北京酿酒总厂生产，约为10.2 mmol/L酒精溶液），以1.5 ml/100 g体重每日灌胃1次，分别连续灌胃4、8、12、16 w。对照组以等量0.9%氯化钠溶液，每日灌胃1次。 1.3 实验标本制备 分别于造模4、8、12、16 w末，禁食12 h，水合氯醛麻醉动物，下腔静脉采血，分离血清，用于检测血清游离脂肪酸（FFA）水平；同时，快速取部分新鲜肝组织在4℃下制成肝组织匀浆，经高速离心后取上清，用于检测肝组织中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力；并取一部分肝组织经液氮速冻保存，用于RT方法检测PPAR的表达。 1.4 实验方法 采用比色法测定血清FFA水平；制备肝组织匀浆，分别测定肝组织中MDA含量和SOD活力。以上均严格按照试剂盒（南京建成生物工程公司提供）操作说明操作。 按照总RNA提取试剂盒（美国BBI公司产品）操作说明提取总RNA，经变性琼脂糖电泳法检测其完整性，以随机引物（由沈阳联星生物技术有限公司设计合成并纯化，见表1）逆转录合成cDNA，分别以适量cDNA为模板进行PCR扩增反应。 表1 目的基因引物序列及反应条件 反应参数：95℃预变性2 min，然后95℃变性30 s，59℃退火30 s，72℃延伸1 min，共30个循环，反应结束前72℃加时延伸5 min。PCR产物在2%琼脂糖凝胶上80 V恒压电泳2 h，经凝胶成像系统分析成像，以β为内参照，目的基因PPAR与β的条带光密度比值（IOD）作为PPAR的相对量进行比较分析。 1.5 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件包，计量资料采用组间t检验（方差不齐时用t’检验），等级资料用秩和检验，计数资料用χ2检验。 2 结 果 实验过程中，观察组大鼠因灌胃误入气管或胃穿孔（经解剖证实）共死亡10只，其中4、12 w组各死亡2只，8、16 w组各死亡3只，对照组无大鼠死亡，各组之间无显著性差异（P＞0.05），具有可比性。 2.1 血清FFA水平变化 随造模时间延长，观察组大鼠血清FFA水平逐渐增加，造模8 w后开始更为明显，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）；组间比较差异亦有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）。见表2。表2 各组大鼠血清FFA水平变化与对照组比较