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宫颈癌蛋白质组学研究进展课题研究_临床医学论文 宫颈癌蛋白质组学研究进展课题研究_临床医学论文 作者：闵卫利，苏宝山，杨军，李牧，高艳娥，仵文英 【关键词】 宫颈癌 ［摘 要］ 蛋白质是生命活动的执行者,利用蛋白质组学的方法检测蛋白质谱的变化,将有助于肿瘤的诊断和治疗。本文就蛋白质组学在宫颈癌组织蛋白中的表达、HPV致癌机制、化疗药物作用机制等方面的进展做一概述。 　　［关键词］ 宫颈癌；蛋白质组学；2DE；质谱；HPV 　　宫颈癌发病率居全球女性恶性肿瘤的第二位，每年约有50万宫颈癌新发病例，其中 80%在发展中国家，我国每年约有新发病例13.15万，占世界新发病例的28.8%。近年来宫颈癌发病率有明显增高及年轻化的趋势，严重威胁广大妇女健康的疾病。蛋白质组学的兴起为宫颈癌的研究提供了理想的技术平台,对寻找其相关生物标记、探讨其发病机制、开发新的药物等有着重要的意义。 　　1 宫颈癌标记蛋白 　　目前诊断宫颈癌主要依据宫颈细胞学涂片检查,但其早期诊断阳性率较低,因此寻找早期诊断和治疗宫颈癌敏感、有效的方法极较迫切。Govorukhina等［1］用特异抗体、染料配基（针对清蛋白）、蛋白A或G（针对球蛋白）使宫颈癌患者血中的白蛋白和球蛋白耗竭，然后用SDSPAGE和LCMS法检测到ng/ml水平的SCCA1。说明蛋白组具有高度的敏感性和准确性，可用来寻找新的肿瘤标志物。在肿瘤发生发展中,常伴有某些蛋白质被表达或抑制,确定和筛选特异的肿瘤标志物将有助于肿瘤的早期诊断、治疗和预后评价。Trejo等［2］使用SDSPAGE方法对正常宫颈细胞及宫颈癌细胞的膜蛋白进行检测发现,29例正常的宫颈细胞中有一种高度表达的蛋白质；而48例肿瘤细胞中则有三种预示病人有一个完全的临床反应的蛋白质,并有一种高分子量蛋白表达下调或丢失。但是没有检测到与肿瘤临床病理相关的蛋白。Matsui等［3］使用2DE和MALDITOF～MS技术在ME180宫颈癌细胞中鉴定出IFNγ、TNF调节蛋白和三种细胞因子调节蛋白（丙糖酸磷酸化异构酶、蛋白酶体亚单位C3及GTP连接蛋白RAN）。Sahota等［4］使用WSQ4蛋白芯片(020000Da)，在50例患者（包含宫颈癌和非癌患者）中检测到32个蛋白峰，它们全部出现在阳性组或对照而在另一组缺如。说明宫颈癌组细胞的蛋白与非癌组有明显差异。 Wonga等［5］使用SELDI技术和WCX2蛋白芯片检测35例浸润性宫颈癌（17例早期，18例中晚期）和2例正常组织的蛋白情况：检测到50个蛋白峰；进一步双盲选择35例患者（20例癌，15例正常），在癌中2个蛋白下降，13个蛋白升高；然后通过AUC挑选出7个蛋白(这些蛋白在肿瘤均下降)区分癌的敏感性87％，特异性100%,阳性预测值100%，阴性预测值87％。但是在早期和晚期组之间没有检测到特异的分子。研究显示SELDI技术具有高通量、高敏感、高特异等特点，可应用于宫颈癌早期诊断。除了分析整个癌细胞蛋白，单独分析细胞核的蛋白也引起人们的关注。Keesee等［6］通过2DPAGE检测到20例宫颈癌NMP(核内的非染色体结合蛋白)有5个多肽链，而在10例正常组织未检测到。另有研究显示用NMP179检测宫颈高度鳞状上皮内病变有96%的敏感性［7］，提示其可用于宫颈癌前病变诊断。宫颈轻中重度不典型增生(CIN1、CIN2、CIN3)如及时治疗分别有15%、30%、60%的癌变这一过程。寻找癌与不典型增生的差异对癌变的干预性预防有重要意义。Keesee等［8］用蛋白组学检测宫颈的不典型增生上皮，发现EGFR和TfR检测宫颈上皮重度不典型增生有较高的准确性（100％、96.3％）。Eggeling等［9］用显微切割技术和SAX2芯片研究3例宫颈癌标本和4例宫颈上皮瘤标本发现:12027Da在癌中过度表达，10205Da，10953Da，12738Da，13283Da在上皮瘤中过度表达。说明这四个蛋白可能与肿瘤的浸润有关。从宫颈癌的蛋白研究可看出：正常组织与肿瘤组织蛋白不仅有量的差别，也有质的区别；蛋白组学在研究组织蛋白方面有明显的优势，可用于肿瘤在早期诊断；也为建立宫颈癌蛋白组数据库提供丰富资源和研究方向。 　　2 HPV与宫颈癌 　　HPV广义上分为低危组和高危组,高危型HPV (16、18型等)主要引起重度不典型增生和浸润癌。探讨HPV引起宫颈癌细胞蛋白变化对其诊治有重要意义。Choi等［10］用蛋白组分析感染和未感染HPV 的HaCaT细胞（人永生角化细胞株）和宫颈鳞癌细胞蛋白（共64个电泳点核31个，浆蛋白33个）显示：感染组与非感染组在原癌基因及癌基因产物、细胞周期调节蛋白、基因稳定调节蛋白、端粒酶活性、细胞的永生化程度等方面明显不同；并发现Mdm2、Mdm4与E6癌蛋白致癌密切相