夹心ELISA方法检测生肉混合物中的猪肉成分的研究.pdfVIP

动物医学进展。2010，31(S)：20—22 in Medicine Progress Veterinary 夹心ELISA方法检测生肉混合物中的猪肉成分的研究 骆训国，栗绍文，周蕾蕾，赵苏红，皮远鹏，王倩，孟宪荣。，毕丁仁 (华中农业大学动物医学院，武汉430070) 摘 要：肉品掺假的鉴别是影响食品安全的一个重要问题。采用抗猪IgG-Fc单克隆抗体作为捕获抗 标抗体最佳浓度为1。5000稀释。结果混合物中猪肉掺杂仅为1％时，有明显反应。该方法具有快速、简 便、灵敏度高、特异性强等优点。 关键词：夹心ELISA；检测；猪肉；IgG 中图分类号：$851．4 文献标识码：A 3 000 由于宗教、健康等原因，许多国家制定法规要求 r／min离心15min，取上清。 食品标签真实明确地标出肉类来源，禁止掺假作伪， 1．2．3夹心ELISA检测方法的建立 以保护消费者的利益。但是以低经济价值的肉冒充 1．2．3．1操作步骤 采用常规夹心ELISA方 高经济价值的肉类的现象普遍存在，因此肉种类的 法[61，用包被液将纯化的抗猪IgG-Fc单抗适当后加 鉴别一直是食品分析方面的一个重要问题。国内外 入96孔酶标板，每孔100弘L，4℃包被过夜；洗涤 学者对不同动物肉种类鉴别技术进行了研究[1蜘。 以多克隆抗体为材料建立的免疫学检测方法存在交 30 叉反应，灵敏性低，不利于现场操作。本试验的目的 孵育30 在于以抗猪IgG-Fc单克隆抗体作为捕获抗体，建立体，37℃孵育30min，洗涤后加TMB显色，2mol／L 检测猪肉成分的夹心ELISA方法。 H：S0。终止反应后测OD枷值。 1材料及方法 1．2．3．2包被单抗浓度的确定用包被液对纯化 1．1材料 不同浓度后，对生猪肉肉浸液和稀释液(阴性对照) 1．1．1 检测样品 生猪肉、生牛肉、生羊肉、生兔 采用夹心ELISA进行检测。OD阳在1．0以上， 肉、生鸡肉市场或超市购买。 OD阳／ODin最大时的包被浓度作为最佳包被浓度。 1．1．2 仪器和试剂 酶标仪BIO-TEK公司产品 1．2．3．3特异性试验对生牛肉、生羊肉、生兔肉、 (ELX800)，96孔酶标板(浙江省玉环县康佳医化器 生鸡肉进行检测，验证方法的特异性。 械厂)，电动玻璃匀浆机(宁波科生仪器厂)。纯化抗 1．2．3．4敏感性试验 检测50％、20％、10％、 猪IgG-Fe单克隆抗体(本实验室制备并保存)；羊抗 5％、1％生猪肉掺杂的牛肉和羊肉的肉浸液，评价方 猪一HRPPIERCE进口分装；牛血清白蛋白(BSA) 法的敏感性。 Sigma进口分装；其他化学试剂均为国产分析纯。 1．2．3．5重复性与稳定性检测 取8份不同批次 1．2方法 的生猪肉肉浸液，每个批次设置5组重复，作重复试 1．2．1 掺假样品的制备 牛肉、羊肉中分别掺人 验，验证夹心ELISA方法的重复性；取4个不同批 1％、5％、10％、20％、50％的猪肉，依上法制备得到 次包被的ELISA反应板，分别对8份不同批次的肉 猪肉掺杂肉浸液[3]。