粒细胞集落刺激因子和卡拉胶相互作用的毛细管区带电泳研究.pdfVIP

粒细胞集落刺激因子与卡拉胶相互作用的 毛细管区带电泳研究· 梁爱叶1杜昱光1王克夷2林炳承1# l中国科学院大连化学物理研究所，大连，116023 2上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所，上海，200031 粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是一种多功能的细胞因子，它刺激造血祖细胞增殖和定 向分化成嗜中性粒细胞系，激活成熟嗜中性粒细胞的功能，并抑制其凋亡[卜5]。目前临床 上重组G-CSF主要用于降低危及生命的嗜中性白血球减少症病人的感染，特别是强烈细胞毒 素化疗以及骨髓移植后的病人[3，4]。G-CSF还用于迁移外周血祖细胞以进行骨髓移植和血 库建立。但重组G-CSF在体内很快被清除并需要每天皮下注射给病人[4]。所以发展能延长 G-CSF的循环半衰期并具有潜在治疗效果的方法，是病人和医护人员所共同感兴趣的。成纤 维细胞生长因子(FGF)在与肝素结合后，增强了FGF与其受体的结合能力和在体内的稳定 性，延长了其在体内的循环半衰期[6]。这一结果启示：是否G-CSF也能和肝素或其它硫酸 多糖结合而达到延长G—CSF半衰期或其它潜在的治疗效果?我们研究了G—CSF和肝素的相互 作用，发现肝素和低分子量肝素都能和G-CSF结合[7]。与肝素类似，卡拉胶也是一种硫酸 多糖，主要用于添加剂以提高食品的结构、凝胶化、稳定性和粘性[8]。卡拉胶有三种形式： 拮抗剂[9]。所以卡拉胶是潜在的药物对象，实际上，卡拉胶也经常被用在制药工业。 本文考察了G—CSF与三种卡拉胶(K，l和入)以及K卡拉胶寡糖的结合。结果表明， 三种卡拉胶无选择的结合，但G-CSF与卡拉胶结合与否还与糖链的长度有关。 1．G-CSF和卡拉胶相互作用的毛细管区带电泳研究 uM 用1．90—5．69G-CSF做工作曲线，样品峰高和浓度成正比，其关系可表示为 (图1)可见，随着入卡拉胶浓度的增加，G-CSF的峰高逐渐降低，峰面积逐渐减小，同时 在G-CSF峰后有一新峰生成，新峰随入卡拉胶浓度的增加峰高和面积都增加。即G-CSF的自 由浓度逐渐降低，而络合物的量在逐渐增加。由工作曲线求出G—CSF的自由浓度，并计算结 ×105 M-1。结合比为28：1。采用同样的方法研究G-CSF与K和L卡拉胶的结合，发现有与上 述结合类似的现象。这两种卡拉胶也都能和G-CSF结合，而且结合常数很接近，分别为6．01 ×106和7．44×10。M～，结合比分别为8：1和17：1。 2．G-CSF和卡拉胶寡糖相互作用的毛细管区带电泳研究 0．06 G-CSF和1．5 g／L g／LK卡拉胶寡糖单独毛细管电泳分离时的峰高和峰面积与将 二者混合后再电泳分离时几乎没有任何变化(图2)。保持G-CSF的浓度不变，将K卡拉胶 寡糖的浓度增加到10g／L时，G-CSF的峰高和峰面积也没有变化。说明G-CSF和K卡拉胶 2—3．02-02)资助。 ”通讯联系人Email：bclin@dicp．ac．cn 145 寡糖没有相互作用。 0．01AU d ————————————————————-／＼，———／L—一。 一s。：!：!：竺竺!：!!：二二入．J’—————————。——————o——————————o V。———————————————一U。 6一G．SFa ————————————————————————L，一。———————一C ‘ 5 ● 7 3