H182.Notch信号途径对小鼠骨髓EPC与EOC调控作用的研究.pdfVIP

H182.Notch信号途径对小鼠骨髓EPC和EOC调 控作用的研究 第四军医大学唐都医院血液内科，西安710032 陈静园 H184.与LIM结构域蛋白FHLlC相互作用蛋白的 梁英民 第四军医大学基础部遗传与发育生物学教研室 秦 检测 鸿雁 韩骅 第四军医大学唐都医院血液内科，西安710032 朱冰柯 目的 明确Notch信号途径对内皮干/祖细胞(EPC和 梁英民 第四军医大学基础部遗传与发育教研室 秦鸿雁 EOC)功能的影响及其调控机制。方法 通过RBP-J条件性 付伟 赵俊龙 曾秀丽 韩骅 基因剔除小鼠，观察了Notch-RBP-J信号对于EEPC和EOC 目的 寻找与LIM结构域蛋白FHLlC相互作用的新蛋 参与的肝再生进程的调控作用。结果 ①通过体外贴壁扩 白以期进一步阐明其阻断Notch信号途径的作用机制并设 增培养，从小鼠骨髓细胞中成功培养出EEPC和EOC， 计优化新型Notch信号的阻断剂，从而寻找治疗急性T细胞 CD34+CD133+VEGFR2+EEPC率从最初的0.08％能够扩增 淋巴细胞白血病(T-ALL)的新途径。方法 通过构建的 至50％；②在三维管腔形成实验中，EEPC不能形成管腔样 FHL1C真核表达载体转染293T细胞，Westernblot检测确认 结构，而EOC能够形成管腔样结构并且受到Notch-RBP-J信 FHLlC表达阳性后，以FHLlC为 目的蛋白进行免疫共沉淀 号通路的调控；阻断Notch-RBP-J信号通路后，EEPC的增 实验拉下与之相互作用的蛋白后，通过银染色实验对比发现 殖，迁移,CXCR4的表达均呈下降趋势；而EOC的增殖、迁移 新的相互作用蛋白后进行质谱分析从而得出新的与之相互 以及CXCR4的表达呈上升趋势。 作用蛋白。 H185.骨髓基质细胞在急性淋巴细胞白血病耐药的 作用及机制研究 浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心，杭州 310003 杨杨 孙保华 SaradhiMallampati 孙晓平 蔡真 H183.FHLlC真核载体的构建与鉴定 目的 探讨骨髓基质细胞(BMSC)在急性淋巴细胞性 第四军医大学唐都医院血液内科，西安710032王凯 白血病(ALL)耐药中的作用及机制。方法 以RS4;11、 英民第四军医大学基础部遗传与发育教研室 秦鸿雁 韩 SEMK2、Reh3种ALL细胞株及6例ALL患者的原代细胞为 骅 对象，将之与人或鼠的BMSC细胞共培养，Ara-C诱导ALL 目的 构建FHLlC的真核载体，为进一步研究T-ALL 细胞凋亡。构建RehLuc细胞，荧光仪检测细胞增殖。流式 发生机制提供前期基础。方法 以人淋巴细胞cDNA文库 细胞术检测细胞凋亡和细胞周期，Westernblot检测凋亡蛋 为模板,PCR扩增回收产物，插入pMD-18T克隆载体，转化 白、细胞周期蛋白及信号通路蛋白。基因芯片，蛋白芯片检 XL-10后获得酶切正确的阳性克隆，测序获得序列正确的 测Ara-C作用下单独培养和共培养RehLuc细胞基因和蛋白 FHLlC基因。此阳性克隆提取质粒后以EcoRI和Sail酶切 表达。 后回收该基因片段，以EcoRI和SalI双酶切真核表达载体 pEGFP-C1后回收该载体片段，将两片段经DNA连接酶进行 连接反应，连接产物转化感受态细胞XL10，挑取单克隆培养 过夜，提取质粒，经EcoRI和SacII酶切鉴定，对获得预期大 小的插入片段的载体进行测序，测序正确的载体命名为 pEGFP-C1-FHLlC，此即为构建正确的真核