母--儿细胞转运和HBV宫内感染关系的研究.pdfVIP

第二届全国分子流行病学学术会议(论文集) 2004·长春 母一儿细胞转运与邸v宫内感染关系的研究 魏俊妮1王素萍1史晓红卜李淑珍1 冯丽萍2双杰玉2 (1．山西医科大学，’山西太原03000l；2．太原市传染病医院) 【摘要l目的：了解HBSAg阳性孕妇细胞是否可进入胎儿血循环，探索母一儿细胞转运与HBV宫内感染关系． PcR， 方法：用等位基因特异性PCR(allele-specific PBMc可能介导HBV穿过胎盘屏障感染胎儿． 【关键词】宫内感染；等位基因；PBMc；HBv；PcR HBV 目前，国内外学者将皿V宫内感染的传播机制 DNA、选择性PCR检测PBMCDNA，任一 归结为血源性和细胞源性两种学说，但这两种学说尚 项阳性者判定为HBV宫内感染。 不能解释无此二因素却发生髓V宫内感染甚至仅表 1．2材料与方法 现为新生儿PBMC皿V感染的现象。早期的研究已1．2．1标本的采集与制备采集孕妇肘静脉血及其出 表明，正常情况下母亲的细胞可少量通过胎盘屏障。 生24小时内的新生儿股静脉血各4ml，分为抗凝血与 非抗凝血两管，非抗凝血离心，吸取上清，-20℃保存 那么，HBSAg阳性孕妇细胞是否可通过胎盘屏障进入 胎儿血循环，HBV通过细胞转运而感染胎儿?这是很 值得探讨的与船V宫内传播机制有关的重要问题。 核细胞于1．5ml无菌离心管中，．20℃保存备检。 为此，本文采用等位基因特异性PCR(AS-PCR)和1．2．2人类基因组DNA的提取采用经典的蛋白酶K 半巢式PCR(hemi．nPCR)方法及多因素分析方法探一酚氯仿提取法。 DNA及PBMCHBVDNA的检测 讨母一儿细胞转运与皿V宫内感染的关系，以阐明 1．2．3册sAg、瑚V 船V宫内感染机制，为船V宫内感染的预防和控制 用ELISA检测血清船SAg，试剂盒购于上海科华实 提供科学依据。有关研究国内外尚未见报道。 业总公司。用巢式PCR技术扩增血清}珏≥Ⅵ)NA【¨。 DNAf21。 1．对象与方法 用选择性PCR技术检测PBMC船V 1．1研究对象 以2001年12月至2003年10月由1．2．4用AS．PCR方法确定母儿信息病例对筛选母 太原市传染病院妇产科进行产前检查并分娩的 HBsAg阳性孕妇及其新生儿各123例作为研究对 象，并将新生儿分为宫内感染组和非宫内感染组。 宫内感染的诊断标准为：出生后24小时内采集股 子(纯合插入II型或纯合缺失DD型)者作为信息病 例对。所用引物序列见表l。 静脉血，ELISA检测HBsAg、套式PcR检测HBV 基金项目：国家自然科学基金资助项目。 作者简介：魏俊妮(1976．)，女，山西长治市人，硕士，助教，主要从事传染病分子流行病学研究． 一194— 第二届全国分子流行病学学术会议(论文集) 2004·长春 表1引物序列 s 1．2．4．1检测谷胱苷肽-S·转移酶M1(91此池ione 仃ansfer船e Ml，GSTMl)基因多态性人群中约有 亲特异性插入基因(I基因)，其中引物ACE—P3和 50％的人不表达GSTMl，使人类GSTMl基因多态性 表现为GsTMl(+／+一+／-)和GsTMl(．／．)嘲。引物 GSTMl．P1和GSlMl．P2扩增片段长度为273bp，用