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农杆菌介导几丁质酶基因转化南瓜的研究
王晶晶屈淑平崔崇士‘
(东北农业大学园艺学院哈尔滨150030)
摘要：选用“金辉一号”为试验材料，通过农杆菌介导成功地将菜豆几丁质酶基因导
入到南瓜中，4株转化植株的PCR检测结果为阳性，扩增出900bp的目标带，初步证明几丁质
酶基因整合到南瓜基冈组中。
关键词：南瓜；根癌农杆菌；几丁质酶基因；遗传转化
IntroductionOfChitinaseGeneInto
PumpkinBy
Transformation
Agrobacterium-Mediated
WangjingjingQushupingCuichongshi
ofNortheast
AgriculturalUniversity,Harbin
(HorticulturalCollege 150030)
Abstract：Thechitinasefrom beanwasintroducedinto JinhuiI
gene kidney Pumpkinby
mediated transformedwere and 900
transformation，four
Agrobacterium plants positivegot bp
the
the bandsPCRmethodandthe hasbeenintroducedinto
target by gene genome．
Keywords：pumpkin；agrobacteriumtumefaciens；chitinasegene；genetic—transformation
1．引言
南瓜营养丰富，具有较高的食用价值和经济价值。南瓜的真菌病害大大降
低了南瓜的产量和品质。常规育种方法因周期长，很难满足南瓜生产对抗病品
种的需求。近年来以导入目的基因创造新种质的生物技术手段的应用，为南瓜
抗病育种的选育开辟了一条新途径。本试验是用广谱抗真菌的几丁质酶基因转
化南瓜，试图为南瓜抗病育种寻求一条快速有效途径。
2．材料与方法
2．1植物材料
本试验选用“金辉一号”南瓜品种为农杆菌介导转化的外植体，由东北农
业大学南瓜实验室提供。
2．2菌株及质粒
本试验所用根癌农杆菌(Agrobacterium
双元载体PBCH，由黑龙江省农业科学院李柱刚惠赠，其结构如图l。质粒PBCH
第一作者简介：王晶晶，女，东北农业大学硕士研究生，主要研究方向：蔬菜育种。
★通讯作者：崔崇士，男，教授，博士生导师，主要研究方向：蔬菜遗传育种和生物技术研究
Emaih
shwkj@mail．neau．edn．cn
2006年哈尔滨市科技攻关项目编号÷2006AA6BEl63
农杆菌介导几丁质酶基因转化南瓜的研究
II)和菜豆几丁质酶基因，PBCH质粒大约是
含有新霉素磷酸转移酶基因(NPT
13．4Kb，目的基因900bp左右。
图1质粒PI虻H的结构图
2．3转化与筛选
2．3．1菌液准备
将含有目的基因的农杆菌涂布在含有抗生素的同体LB(胰化蛋白胨10∥L+
平板上，28℃暗培养1．2天，至长出单菌落。挑取单菌落接种于含有相应抗生
素的5ml液体LB培养基中，28。C，200rpm进行二次活化，当菌液浓度达到
用等体积的液体MS培养基
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