RT-PCR及RFLP分析技术对禽传染性支气管炎病毒的诊断与S1基因鉴别的研究.pdfVIP

生旦查堑璺矍兰量童塞兰壁垒墨上壅兰查竖过叁丝塞墨 RT—PcR及RFLP分析技术对禽传染性支气管炎 病毒的诊断和S1基因鉴别的研究 磨美兰李康然韦 平 (广西大学动物科技学院。广西南宁，530005) 摘要本研究使用分别扩增整个sl糖蛋白基因(引物A)和sI糖蛋白基因N一端高变区I(引物B)的两对引 I、Rsa】限制性内切酶消化．根据它们的 和D4LA则分别具有互不相同的图谱；对228bp的PcR产物进行Dde 七个基因型，分型的结果与传境的血清学方法基本吻合^本研究建立的方法和技术具有快速、简单、特异、灵敏等优 点．为现场流行毒株的定型(基因氆，血清型)及其s1基固变异的研究以及更有效防制传染性支气管炎奠定了基 础． 81基因RT一9。R (关键词18V 89。9{＼ c入 鸡传染性支气管炎(1B)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触传染 的病毒性呼吸道疾病。此外，lB还可侵害生殖泌尿系统．近年来又有侵害腺胃、肠道、肌肉“。的报 道。lB可使鸡的增重和饲料报酬率降低，产蛋鸡的产蛋量及蛋的品质下降，给养鸡业带来较大的经 济损失。 本病自l 广东的邝荣棘首先发现此病，1982年分离出肾型lBV，目前肾型IB已在20多个省(市、区)流行。 986 李康然等’1在80年代初期首先确定肾变病型IB在广西流行，广西大学养禽与禽病研究所于l ～1987年在广西分离到4个IBV毒株，经血清分型研究首次在国内证实有多个血清型的流行。1“。 由于IBv血清型众多，目前至少有26个血清型“】，变异株叉不断出现，各血清型之间的交叉反应 程度不一，因此免疫鸡群也会暴发lB。故建立敏感、特异，快速的IB诊断及IBV血清型鉴定方法是 有效防制IB的迫切课题之一。 lBv为典型的冠状病毒，基因组为线性单链正股RNA，全长约27．6kb，有三个主要结构蛋白， 有与病毒中和、细胞吸附和血清型特异性有关的抗原位点，也是IBV蛋白中变异程度最大的结构 蛋白o]。当出现变异株时，原有疫苗也不能很好地起保护作用。田此及时弄清本地区流行IBV的血 清型极其重要， IBv传统的诊断、分型方法为病毒中和试验和红细胞凝集抑制试验，其它检测方法如电镜、免 疫荧光、斑点免疫金测定法、琼扩试验、ELIsA、放射性同位素标记、核酸探针等也用于lB的诊断， 单克隆抗体技术、序列测定也用于IBV的血清型鉴定．但这些方法在特异、敏感、快速、实用、安全 方面均存在一些缺点。而新兴的分子生物学技术反转录酶聚台酶链反应(RT—PcR)及限制性内切 酶酶切片段多态型(RFLP)分析技术具有简便、快速、特异、灵敏的特点。RFLP分析就是根据不同 一7R一 主垦董墼璺堕芏盒苎堑堂堂叁蔓土选芏苎婴过童垂塞整 个体的等位基因由于碱基的变化(置换、缺失、重排)而引起其限制性内切酶酶切片段的数目和长度 发生变化而发展的一种技术。通过比较相关基因的限制性内切酶图谱就可以大致看出它们的同源 性及差别。据此可将各个毒株分成多个基因型(genotype)。因此这一技术在传染病的流行病学和病 993)”1 991)n1首先使用这一技术对IBV进行分型。Kw。n等(1 原学的研究方面特别有用。Lin等(1 wang等[“”J、王林川等““”]、江国托等“¨一些研究者也进行了研究。 目前，国内学者采用最多的引物是扩增整个s1基固的引物，但因为其扩增产物比较长．加上 59～