P-selectin%2fPSGL-1分子间相互作用的原子力显微镜探究.pdfVIP

原子力显微镜研究 叶志义，杨学恒，靳平 (重庆大学生物工程学院，重庆400030) 籀婺：在炎症反敷中，白细胞在血液流动动力和粘附分子的作用下在血管内皮上的滚动，是白细胞从流动的 斑液中浸润、迁移到炎症部位整个过程的第一步。白细胞在内皮细胞止滚动由选择素分子与其配体分 作用起着燕要的作蒲。原子力显徽镜技未能定量分析P—selectin／PSGL-1相互律嗣的动力学旋应。 关键词：P选择素；P一选择素糖蛋白配体．1；原子力显微镜 1 生物背景中的科学问题 在免疫反应中，囱细胞与肉皮细胞的粘附起着燕要的作用。细胞粘附分子闻相互作用可用反应动力 学参数来描述，如反应速率、反腹亲和性等。正是这些参数决定着受体一配体反应发生的可能性、快慢以 导致血液流动动力学作用下自细胞滚动，这正是白细胞从流动的血液中浸润、迁移到炎症部位整个过程 的第一步。选择素与配体分子亲和性强且结合速率非常快，=者结合所形成的复合体能承受较高的拉力 显能控制其缝合藤不至于使其翻身的分子扶细胞膜拔出，表嚷选择素及其配体耦合了力学翱生化的特 征；同时这对分子的生物化学性质以及相应结构和功能已描述的很清楚，是在分子水平上研究反应动力 学及粘附力进行机制的一对典型分子系统…。 寿命? 力学过程，蔟核心是攘互作用时键的形成期键的鳃寓，瑟键的形成秘解离与时闯的关系就是反应动力学， 表现为分子间结合时正反应率和零力时键解离时负反应率，以及键在外力作用下唐勺负反应率。那么，要 霹震力学方法来测量纯学反应，是蠢为作为反应产物的分子键的功能，恰恰是为两个细您提供物理连接， 因此反应的结果便可从力学的角度来检测¨j。细胞粘附可以用不同的实验手段来定量测量如：流动腔”1 (Flow Force Microscope，AFM)或激光镊子瓣引(LaserTweezers)等超灵敏力传感器来测量。 2 原子力显微镜的工作原理及特点 tunnel AFM是在扫描隧道显微镜(Scanner 缒。…． STM问世。1986年由Bining 相互作用力(原子力)来获得物质表面形貌的信息。AFM工作原理就是将探针装在一弹性微悬臂的一 端，微悬臂的另一端固定，当探针在样品表面扫描时，探针与样品表面原子问的排斥力会使得微悬臂轻微 变形，这样，微悬臂的轻微变形就可以作为探针和样品间排斥力的直接量度。一束激光经微悬臂的背面 反射到光电检测器，可以精确测量微悬臂的微小变形，这样就实现了通过检测样品与探针之间的原子排 斥力来反映样品表面形貌和其他表面结构。 随着AFM技术的迅速发展它在生命科学领域的应用日趋广泛，主要涉及以下几方面：一是，能在液 体等多种环境中得到生物分子及细胞等样品的表面三维图像；二是，能以皮克牛顿(pN)的精确度直接测 量生物分子间及分子内的作用力。 在分子水平对生物分子表面的各种相互作用进行测量，是原子力显微镜的一个十分重要的功能，这 对于了解生物分子的结构和物理特性是很有用的。单分子水平的分子间相互作用的强度的研究是传统 的热力学及统计方法无法实现的，直至nm／pN尺度检测仪器的出现使得这一梦想得以实现。生物分子 间作用力的大小一直为人们所关注，以前尚无任何一种生物技术能够直接测量生物分子间的作用力。原 子力显微技术问世以来，许多研究者将其用于分子间的力学测定¨n14]。1994年Moy等人利用原子力显 微技术的单分子力谱方法研究了生物素分子和亲和素分子间的特异性相互作用H5I。他们在实验过程 中，将一层生物素分子固定于氮化硅针尖上，亲和素分子通过特异性识别作用与生物素分子结合。用表 面修饰有生物素分子的琼脂糖颗粒与结合了亲和素分子的针尖接触，当针尖进一步逼近琼脂糖颗粒时， 亲和素分子的另外两个结合位点与生物素分子发生配体一受体识别并特异性作用而结合；当针尖远离琼 脂糖颗粒时，这种粘附力使悬臂发生偏转，随着悬臂弯曲度增大，针尖与颗粒间相互作用受到不断拉伸，