实验十醋酸纤维薄膜电泳血清白蛋白分析.pptVIP

* * 实验十、醋酸纤维薄膜电泳－－ 血清蛋白分析和 人体动脉血压的测定 一、目的和要求 １、了解电泳的原理，掌握醋酸 纤维薄膜电泳的操作 ２、学习动脉血压的原理，测定 收缩压与舒张压 二、实验原理 （一）电泳 在外界电场的作用下，生物大分子从电极 一侧向另一侧移动的现象 1、蛋白质 由氨基酸通过肽键连接而成 2、等电点 (isoelectric point, pI) 在一定的pH条件下，当其正、负电荷数相等 时，整体便失去了所有电荷，这时的pH称为等电 点（pI）。 氨基酸在等电点时电泳移动速度为零 在碱性环境中，蛋白分子 负电 阳极 在酸性环境中，蛋白分子 正电 阴极 3、醋酸纤维素薄膜 (Cellulose Acetate Membranes) 采用醋酸纤维素为支持物的电泳方法叫醋 酸纤维薄膜电泳，具有很高的流速和热稳定性 以及非常低的吸附，将其溶于丙酮等有机溶剂 中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜 4、血清蛋白电泳 将抽取的血液置入不加抗凝剂的试管中， 使血凝固后，析出的上清液就是血清。 血清中主要含白蛋白、球蛋白。 血清蛋白电泳是一种临床化验检查项目。 由于蛋白的绝大部分均由肝脏合成，所 以，各种蛋白质的质与量的变化，除与免疫 性疾病等有关外，主要反映肝脏的生理、病 理情况 血清中各种蛋白质的等电点均低于 pH 7.0，在pH 8.6的缓冲液中带负电， 向正极移动，分子小且带电荷多者，则 移动速度较快 57~72 4.64 清蛋白 2~5 5.06 ?1球蛋白 4~9 5.06 ?2球蛋白 6.5~12 5.12 ?球蛋白 12~20 6.86~7.3 ?球蛋白 % pI （二）血压测定 1、血压 是指血管内的血液对于单位面积血管壁 的侧压，目前采用千帕(KPa)为单位。以前 采用 mmHg 表示。 收缩压：收缩期动脉血压的最高值 (高压) 舒张压：舒张期动脉血压的最低值 (低压) 2、血压测定方法 此次实验采用Korotkoff氏听诊法 正常的收缩压/舒张压 (mmHg) 收缩压: 130 mmHg 舒张压: 85 mmHg 无光泽面 座位号 1.5 0.5 三、实验方法 （一）电泳 1、薄膜的使用 在毛（无光泽）面划线， 并写上座位号（如右图） 2、浸润 3、点样 （毛细管，一根，放回） 4、电泳 点样面朝下 点样端置于负极 5、染色 染色10min 6、漂洗 脱色各5min（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ） 最后，水洗 （二）侧血压 1、血压计的构造：减压计、袖带、 气球 2、安静时收缩压/舒张压 （120/80mmHg） 3、运动后的收缩压/舒张压 四、实验报告 1、将电泳后的醋酸纤维薄膜 贴在报告本上并在旁边用 铅笔按样描图 2、记录血压（安静、运动） 预习：实验十七 复旦大学生物化学系 黄伟达 * 氨基酸的两性离子 两性离子也称两极离子（dipolar ion） Dipolar ion 两性电解质（ampholyte） * * *