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微生物学复习 第二章 纯培养和显微技术 第一节 微生物的分离和纯培养 一、无菌技术(在分离、转接及培养纯培养物时防止其被微生物污染，其自身也不污染操作环境的技术) o 用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； o 在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染，其自身也不污染环境； 1. 微生物培养的常用器具（试管 玻璃烧瓶 培养皿）及其灭菌（高压蒸汽灭菌可杀死微生物休眠体：芽孢 高压干热灭菌） 2. 接种操作：在无菌条件下，用接种针或接种环挑取微生物，把它有一个培养皿转接到另一个培养皿进行的操作。是微生物最常用的基本操作。 二、用固体培养基分离纯培养 菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。 菌苔：在还固体培养基表面众多菌落连成一片时便成为菌苔。 不同微生物在特定的固体培养基上生长形成菌落和菌苔都具有稳定的特征，可成为对该菌落进行分类鉴定的重要依据。 培养平板：被用于微生物纯培养的最常用固体培养基形式它是冷却凝固后的培养基在无菌培养皿中形成的固体培养平面，简称平板。 以下各方法具体内容参见复印资料第10页 1. 稀释倒平板法：操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！ 2、涂布平板法：使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！ 3. 平板划线法 4.稀释摇管法 三、用液体培养基分离纯培养 1、稀释法 2、富集培养 四、单细胞（孢子）分离 单细胞分离法：采取显微分离法从混杂群体中直接分离单细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。 五、选择培养分离 选择培养分离： 1）、抑制大多数其它微生物的生长； 2）、使待分离的微生物生长更快；使待分离的微生物在群落中的数量上升，方便用稀释法对其进行纯化。 3）、使待分离的微生物生长突出；直接挑取待分离的微生物的菌落获得纯培养。 1、利用选择平板进行直接分离:根据待分离微生物的特点选择不同的培养条件（抗生素平板 牛奶平板 高温培养） 2、富集培养：利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定特定的环境条件，使仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而使其在菌落中的数量大量增加，是人们更容易从自然界中分离到这种所需的特定的微生物。 六、二元培养物 由于微生物体积微小，在绝大数情况下对微生物的研究、利用都是使用其群体，成为培养物。 只有一种微生物的培养物称为纯培养物。 含有两种以上微生物的培养物称为混合培养物 如果培养物中只含有两种微生物，而且是有意识的保持两者间的特定关系的培养物称为二元培养物。 第二节 显微镜和显微技术（具体内容参见复印资料第11页） 一、显微镜的种类及原理 放大倍数：被观察物越小，放大倍数应该越大，否则难以看清。 分辨率：能分辨除两点间最小距离的能力。最小可分辨距离= 反差：被观察物区别于背景的程度。 1. 普通光学显微镜 2. 暗视野显微镜 生活细菌的运动性 3. 相差显微镜 4. 荧光显微镜 5. 透射电子显微镜 6. 扫描电子显微镜 7. 扫描隧道显微镜 二，显微观察样品的制备（略） 思考题： 1、为什么说Koch等建立的微生物纯培养技术是微生物学建立与发展的基石？一般可用哪些方法获得微生物的纯培养？ 2、微生物的最显著特征就是个体微小，通常只能通过 显微镜进行观察。试列举在显微观察（光镜和电镜）中通过改变样 品的反差以改善观察效果的技术及方法。 3、试利用表格形式对各类显微镜在原理、样品制备和观察方面的异、同进行概括、比较。 4、 试找到一篇使用微生物照片的文献，分析该文为什么要使用微生物照片，采用的是何种显微观察技术？依你之见，该文作者的这张照片还可以用哪些技术获得？ 第三章 微生物类群与形态结构 第一节 真细菌 一、一般形态及细胞结构 （一）个体形态与排列 球菌细胞个体呈球形或椭圆形，不同种的球菌在细胞分裂时会形成不同的空间排列方式，常被作为分类依据。 杆状细菌的排列方式常因生长阶段和培养条件而发生变化，一般不作为分类依据。 弧菌：菌体只有一个弯曲，其程度不足一圈，形似C字或逗号，鞭毛偏端生。 螺旋菌：菌体回转如螺旋，螺旋数目和螺距大小因种而异。鞭毛二端生。细胞壁坚韧，菌体较硬。 螺旋体菌：菌体柔软，用于运动的类似鞭毛的轴丝位于细胞外鞘内。 柄杆菌：细胞上有柄（stalk）、菌丝（hyphae）、附器（appendages）等细胞质伸出物，细胞呈杆状或梭状，并有特征性的细柄。一般生活在淡水中固形物的表面，其异常形态使得菌体的表面积与体积之比增加，能有效地吸收有限的营养物； （二）大小 硫磺细菌 最大 纳米细菌 最小 （三）细胞的结构 原核微生物是指一类细胞微小，细胞核无核膜包裹的原始单细胞生物。 与真核微生物的主要区别1、基因组由无核膜包裹的双链环状DNA组成