禽副粘病毒2型(PMV-2)中国分离株地研究.pdfVIP

卿囝 2004学术年会 禽副粘病毒2型(PMV一2)中国分离株的研究 张国中，杨爱梅，陈亮，P春亚，赵继勋 中国农业大学动物医学院，北京100094 毒。电镜观察结果表明F4、F6、F8在形态结构上，没有明显的差异，病毒粒子电镀观察呈球形， 大小差别较大。交叉HI和单抗鉴定结果表明，分离株和PMV2标准株在血清学关系和抗原性上都 存在一定的差异，国内鸡源分离株与Yucmpa标准株在血清学关系上最接近，而进口七彩文乌分离 株与标准株及国内鸡源分离株之间存在明显的差异。HN和F基因序列分析表明，PMV。2的HN基 因和F基因的核苷酸差异都不是很大，相比而言，国内鸡群分离的F8和NK株与标准毒株的序列 同源性最高，尽管F4与F6株分离于同一批进口七彩文鸟，但二者也是存在一定差异的两个毒株。 对于F基因而言，鸡源分离株F8同YucMpa标准毒株相比变异较小，而分离自七彩纹鸟的F4和F6 株则存在相对较为明显的变异。 关键词：禽副粘病毒2型；中国分离株；F基因；HN基因 科、副粘病毒亚科、腮腺炎病毒属。虽然认为PMV一2主要感染火鸡、雀形目鸟，但也不断从 毒的报导。在中国，赵继勋等首先于1998年从一批有呼吸道和拉稀症状的进口七彩文鸟的混 1999年又从 合泄殖腔拭子中分离到两株与Yucaipa病毒有关的禽副粘病毒(F。株和F6株)， 北京地区有拉稀症状和生长不良的商品肉鸡体内分离到一株PMV一2(F8株)。2002年，北京南 口某鸡场肉种鸡发生产蛋下降，从病鸡的气管粘液内分离到一株Yucaipa样病毒(NK株)。我 们对目前的四株中国PMV一2分离株进行了初步研究。 1材料与方法 1．1实验材料 用SPF鸡在隔离器中制备，并与美国SPAFAS公司引进阳性血清进行比对； Yucaipa病毒单克 隆抗体由本实验室制各并保存；分子生物学工具酶分别购自大连宝生物公司、Promega公司以及 GIBCO公司；测序引物由上海生工生物工程有限公司合成；SPF鸡、SPF种蛋，来自山东省农 (京)2002．0018。 1．2疑似PMV．2分离毒的分离鉴定及其阳性血清的制备， 1．2．1疑似PMV．2分离毒的分离鉴定 疑似病料经SPF鸡肝进行病毒分离，分离获得的疑似病毒利用血凝试验(HA)和血凝抑制试 2004学术年会囝螂 验(Ⅲ)进行初步鉴定。 1．2．2PMV．2分离毒的阳性血清制备及纯度鉴定 经初步鉴定的分离毒分别接种2月龄SPF鸡，制各阳性血清并对血清做多种抗体检测，分析分 离毒纯度。 1．3分离株病毒的电镜观察 将F4、F6和F8株病毒用SPF鸡肝繁殖复壮，收获尿囊毒经差速离心和蔗糖密度梯度离心法纯 化。纯化的病毒分别制备电镜样品和免疫电镜样品，利用透射电镜观察病毒形态(33000；)。 1．4分离株病毒与标准毒的交叉HI关系 验，分析标准毒与分离毒之间的血清学关系。血凝抑制试验采用微量法按常规进行。 1．5分离株病毒与标准毒抗原性差异分析 及分离毒的结合情况，对病毒的抗原性差异进行分析。 1．6分离株F和HN基因的测序分析 1．6．1分离株F和NN基因的序列测定 0 Premier 和Primer 基因进行克隆、测序。 1．6．2分离株F和I-IN基因的变异分析 应用Omiga2．0等分子生物学软件对所测序列进行比较分析。 2结果与分析 2．1 疑似PMV-2分离毒的分离鉴定及其阳性血清的制备 2．1．1疑似PMV-2分离毒的分离鉴定 疑似病料经SPF鸡肝连续传代，分离到具有血凝特性的病毒，m试验结果表明病毒只能够被 些具有血凝特性的病毒为PMV-2病毒。 2．1．2 PMV-2分离毒的阳性血清制备及纯度鉴定 制备的分离毒阳性血清}Ⅱ滴度如表1所示。阳性血清分别利用多种血清学方法进行抗体检测 明分离毒为单一病毒。 表1 PMV一2标准株及分离株阳性血清HI滴度(1092