人参皂苷Rg3在移植性S180肉瘤荷瘤小鼠瘤内代谢分布地研究.pdfVIP

人参皂苷R93在移植性s瑚肉瘤荷瘤小鼠瘤内代谢分布的研究 富 力1， 阮 军1，王 莉1，杨 威1，寒晓篝1，苏成韭2， 燕秋3，徐跃飞’，刘莲基3，王燕3，任凤’ (1大连富生天然药物开发有限公司；2大连医科大学临床药理系；3大连医科大学基础医学系) 人参皂甙Rgs是蠹丈连謇生天然莼物开发有限公麓研制开发、袁抹蓝泰制莼有限公黉生产麓匿 家一类中药抗癌新药。临床前和临床试验证明，该药有明显的抑制肿瘤作用。我们对该药大鼠药动 学试验结果表明，Rg。在大鼠体内吸收、分布较快，组织中的药物浓度远远高于血浆中药物浓度，药 物在体内不易被代谢，原形药物主要通过粪便排泄：对该药人体药动学试验结果表明，R93口服给药 后翦血药浓度较低；隽了进一步揭示该药体内抗艘癌药效学蘸有效物质基础，同酵撼示该药在黄瘸 动物体内鲍分布与代谢规律，我们又进行了荷痞小鼠体内及瘤恣分布代谢试验。 1材料与仪器 1．】：受试药物 人参皂甙R93(ginsenosideRgs)，吉林亚泰《药有限公霹生产，批号含量：95。王篱。 人参皂甙Rga用l％的CMC-Na配制成适当浓度的混悬液。 1-2标准品 人参皂甙Rga标准I；矗，大连富生天然药物开发有限公司提供，纯度：99．69％；人参二醇标准品，一 贿塞孛溪药燕生物割晶检定所。 王．3试莉 甲醇(色谱纯)，山东省禹王实业总公司化工厂生产；双蒸水，上海亚荣生化仪器厂SZ-93自 动双重纯水蒸馏器制备。 王．4瘤椿 St驺夺鼠怒窿，由丈连医科大学生物纯学教研室传代维持。 L5动物 隰明种小鼠90只，雄性，体重18—22克，由大连医科大学实验动物中心提供，动物合格证号： 辽师动质字2000(028)。 王．S议器 LC-IOA系统控制器：日本岛津公弼生产；LC-10A泵：日本岛津公司生产；LC-10ADVp5．0版王 作站：豳本岛津公司生产；500ELSD蒸发光散射检测器：Alltech公司生产；DL_l型固相萃取器： 中科院大连化物所生产；超声波清洗机：中船七院七童六所生产；LD5-2A离心机：北京医用离心机 厂生产；TCL计算机(586)：TCL致禳电脑有限责任公司生产。 2试验方法 2．1剂量及取样时间选择依据 根据人参皂甙llg。憔床推荐裁量为0．8mg／kg，设定小鼠最低剂量为6mg／kg，依次按三倍递增关 系，设崇、高裁量分裂凳18mg／kg窝54mg／kg。梵了确定髓够反映蒋瘤夸鼠瓣瘤肉药物浓度交纯豹 钟肿瘤内的药物浓度，根据测定结果选择能够代表肿瘸内部药物浓度变化的取样时间分别为60，120 和240分钟(即l，2和4小时)。 2。2人参皂甙交g，在费sⅢ鸯瘤小鼠依肉妫分布试验方法 237 取生长旺盛的瘤源，无菌条件下用匀浆法制备成约5x106／ml细胞悬液，相应宿主每鼠腋皮下接 种0．2ml／只，于接种后第8天按以上设计的剂量给药。给药后1，2及4小时分别处死动物，取其 心、肝、脾、肾、肺、胃、肠、睾丸、肌肉、脂肪、脑等组织以及肿瘤组织和血浆(每个时间点5 份平行样品，每两只动物的血浆、肿瘤及其他组织分别合并混匀成1份样品)，各组织用生理盐水在 冰浴下制成20％的匀浆，用HPLC-蒸发光检测法测定血浆及组织均浆中药物浓度。 2．3人参皂甙Rg，在荷s-¨肉瘤小鼠体内的代谢试验方法 我们在先前的大鼠体内药代动力学研究中，建立了同时测定生物样品中人参皂甙Rg。及其皂甙 元人参二醇的职LC一蒸发光散射检测方法。该法中，人参二醇的保留时间为46分钟。在本试验中， 我们先按已建立的方法对高剂量组生物样品中的代谢产物进行测试，结果血浆、肿瘤及其他组织在 人参二醇的保留时间处均无色谱峰出现，证明人参皂甙Rg。无论在血浆、肿瘤及其他组织中均无代 谢产物。此外，在我们试验所测的全部样品中，该保留时间亦均无皂甙元色谱峰出现。在本试验30ng 最低检测限条件下，尚未检测到人参皂甙Rg。的体内代谢产物。 2．4生物样品中人参皂甙Rg，分离与测定方法验证 2．4．1色谱条件 色谱柱：ODSC18柱250X 4．6皿I．D．，粒径5岬(北京迫马欧泰科技发展中心)；保护柱： ODSC18柱4x3．0mm v／v)