深黄被孢霉固态发酵生产油脂的工艺参数与发酵前后底物组成变化规律研究.pdfVIP

深黄被孢霉固态发酵生产油脂的工艺参数及 发酵前后底物组成变化规律研究 孙若芸 余冰 毛湘冰 毛 倩 陈洪 陈代文 四川农业大学动物营养研究所，动物抗病营养教育部重点实验室 四川，雅安625014 本试验旨在探 索深黄被孢霉固态发酵生产单细胞油脂 (SCO)的条件及发酵前后底物组成变化 规律。采用单因素试验设计与正交试验设计以优化发酵底物组成及发酵条件，采用化学分析和扫描电镜分析及 X-射线衍射分析法检测发酵前后底物的理化性质以比较发酵前后底物组成变化规律。结果表明，最适的固态 发酵培养基为玉米淀粉和麸皮的混合物，适宜混合比例为1∶3；最佳发酵条件为：接种量30％，含水量60％，装料量60 g/250mL，其中含水量和装料量这两个因素对油脂产量影响极显著(P＜0.01)。此条件下，油脂产量可达10.18 g/100gDW；其中，多不饱和脂肪酸 γ-亚麻酸(GLA)和二十二碳六烯酸(DHA)分别占粗脂肪总量的4.03％和 1.70％；总能从发酵前的3779.77cal/gDW提高到了4885.39cal/gDW。发酵前后底物理化性质分析结果表明，发 酵降低了底物中中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤木质素(ADL)、总淀粉、直链淀粉的含量，提高了底物中还 原糖浓度和蛋白质浓度；扫描电镜分析结果表明，发酵后玉米淀粉颗粒被腐蚀，小颗粒淀粉增多；X-射线衍射图 谱显示发酵使得玉米淀粉晶型结构消失。综上所述，利用深黄被孢霉固态发酵玉米淀粉和麸皮的混合物可生产 含高不饱和脂肪酸的单细胞油脂，其可能原因与发酵底物结构改变以利于微生物利用有关。 深黄被孢霉；固态发酵；玉米淀粉；麸皮；单细胞油脂；理化性质 四川省畜牧兽医学会2012年学术年会 物能量饲料，就有可能缓解能量饲料短缺和环境污染等问题。因此，本研究旨在利用深黄被孢霉固态发酵 玉米淀粉和麸皮的混合物生产单细胞油脂，并对生产油脂过程中，发酵前后底物组成变化规律做了初步探 索。 1 材料与方法 1．1菌种与培养基 isabellinaAs 深黄被孢霉(Mortierella 3．3410)购自中国科学院微生物研究所：葡萄糖、琼脂 粉、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、酵母膏、硫酸铵和柠檬酸钠等化学试剂(均为分析纯)：马铃薯、麸皮， 玉米淀粉和复合蛋白饲料(CPF)，市购，己过40目筛(注：复合蛋白饲料中粗纤维、粗蛋白、粗脂肪含量 分别为3．2％、18．3％和4．9％)。 斜面培养基：马铃薯2009、葡萄糖209、琼n旨159、磷酸二氢钾3．09、七水硫酸镁1．59、蒸馏水 6．0，112。C灭菌20min(注：马铃薯去皮，切成小块煮沸半小时，纱布过滤)。 1000mL、pH 种子培养基：葡萄糖lOg、磷酸二氢钾0．19、硫酸镁0．039、酵母膏0．29、硫酸铵0．29、蒸馏水 lOOmL、pH6．0，112℃灭菌20min。 基础同态发酵培养基：一定比例麸皮和玉米淀粉混合物，柠檬酸钠0．2％、磷酸二氢钾0．2％、硫酸镁 0．05％、含水量50％、自然pH，不灭菌。 I．2方法 1．2．1测定指标及方法粗脂肪、能量、纤维含量的测定参照张丽英：脂肪酸组成及含量的测定参照Ruiz— Rodriguez等：还原糖、蛋白质含量的测定参照杨金龙等：总淀粉含量的测定采用酶水解法：直链淀粉含量 的测定参照王平等：扫描电镜分析、x一衍射分析参照闵伟红等。 1．2．2 种子液的准备 用。 1．2．3发酵底物的筛选采用单【天】素试验设计，分别以玉米淀粉和麸皮(1：1)，玉米淀粉、复合蛋白饲料 理设5个重复，结果以平均数表示。 1．2．4 发酵条件的优化 发酵条件的优化采用正交试验设计，主要考察底物组成比例(A)、含水量 试验，每一个处理苇复3次，结果以三次试验结果的平均值表示。 表1 发酵条件正交试验因素水平 220 第二篇饲料营养 1．2．5验证试验 接种发酵2d的种子液，调节初始pH为6．0，采用双温度培养连续发酵7d，每24h摇动一次三角瓶。设5个重复， 结果以平均数表示。 1．2．6发酵前后底物理化性质分析分别测定验证试验中发酵前后底物的还原糖浓度、蛋白质浓度、纤维 组成、总淀粉含量及直链淀粉含量，并对发酵前后底物做扫描电