溴甲酚绿与血清蛋白质相互作用的电化学研究.pdfVIP

苎丛旦全曼鱼坌堑些堂兰查叁堡堡兰墨————————————一 溴甲酚绿和血清蛋白质相互作用的电化学研究 孙伟 焦奎 (青岛科技大学应用化学系，青岛266042) 蛋白质的定量测定是临床分析、生化分析、疾病检测中的重要指标，关于生物大分子 和有机小分子探针反应机理的探讨，也是生命科学、临床医学和化学研究的重要内容。蛋 白质与小分子有机染料可以在适当的条件下通过非共价键相结合形成一种超分子化合物， 该化合物和染料本身相比在吸收光谱及光吸收程度上有着明显的变化，以此为基础建立了 G-250)为光谱探针测定蛋 许多蛋白质光度分析的方法““1，最经典的是考马斯亮蓝(CBB 白质。溴甲酚绿(BCG)是常用的有机染料，常用于无机元素分析，也可用于蛋白质的光 谱探针。它具有电化学活性，己被用于络合极谱波的研究。本文报道用电化学方法研究溴 甲酚绿与蛋白质分子生成的生物超分子化合物，并可作为蛋白质的电化学探针，试剂和反 应体系均很稳定，并且测定方法简单，灵敏度高，实验结果令人满意。 实验工作在JP-303型极谱分析仪(成都仪器厂)上进行，采用三电极系统：滴汞电 极为工作电极，饱和甘汞电极(SCE)为参比电极，铂丝电极为对电极。 mL mL BCG、2．00．2 1．0×10～mol／L 实验方法是在10ⅢL的比色管中，依次加入2．0 mol／L3．8的B—R缓冲溶液和不同浓度的牛血清白蛋白(BSA)，用水定容，摇匀后静 pH 置15min，以未加BSA的溶液作空白，用电化学法进行研究和测定。 3．8B-R缓冲溶液中，用线扫二阶导数极谱法对体系进行了测定。BCG有一个 在pH 灵敏的二阶导数还原峰，峰电位为一0．39v，当在溶液中加入一定量的BSA后，还原峰的 电位不变而峰电流却极大降低。峰电流的降低值同加入的BSA量在一定范围内呈线性关 系，进而可以用于BSA的电化学测定。 3．8 考察了结合反应的条件。缓冲溶液的pH对反应体系有极大的影响，结果表明在pH 的B-R缓冲溶液中峰电流具有晟大的差值。在10ⅢL测定溶液中，B—R缓冲溶液用量为 1．O～3．0 mL。BCG和BSA反 mL时，峰电流稳定，所以选择B—R缓冲溶液加入量为2．0 应的速度很快，10min后体系即稳定，峰电流值降低值达到最大并且在4小时内保持稳 定；在室温和37C峰电流值无明显的差异，说明该体系对温度的适应性强，温度对反应 的影响不大。用0．2mol／L的氯化钠溶液实验了离子强度对反应的影响，发现离子强度 对测定的影响很小。在pH3．8的B—R缓冲溶液中，固定BSA的浓度，考察了BCG浓度变 和柠檬酸、葡萄糖及金属离子如cu”、zn”、cd2．、Fe”等对测定的影响，结果表明，低浓 度的上述物质对测定的影响不大。 在选定的最佳条件下，峰电流的降低和BSA的加入量在一定范围内呈线性关系，可用 于BSA的定量检测，线性范围为9．0～40．0 mg／L，其线性回归方程为△ 的BSA进行11次平行测定，其相对标准偏差为1．03％。 对人血清实际样品进行了测定，同经典的CBB G一250光度法进行比较。本法测定的含 量为114．2 G一250光度法测定的含量为107．9 mg／mL(RSD：2．71％，n=3)，CBB