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用葡萄糖生物传感器测定发酵过程微生物活细胞数研究 朱思荣毕春元周万里刘仲汇冯德荣 (山东省科学院生物研究所。济南250014) 测定发酵过程中微生物菌体的数量和菌体的生长情况，对发酵过程的控制和发酵产 品的品质控制具有十分重要的意义，本项研究探讨了利用葡萄糖生物传感器，测定发酵 过程中微生物活细胞的方法及测定条件。 一、 测定原理： 微生物细胞在其生长或生活过程中，总是优先利用葡萄糖作为基本能源和碳源，在 细胞没有营养限制因素的条件下，微生物对葡萄糖的利用数量与微生物细胞的数量和细 胞所处的生长时期有关，微生物发酵过程中，一定的发酵时期微生物细胞处于一定的生 长期，所以可以通过测定细胞对葡萄糖的利用量来估测细胞的数量。 固定化酶葡萄糖生物传感器测定灵敏度高，测定速度快，能够满足细胞测定的要求。 二、 测定装置： 待测样品和葡萄糖加入到恒 温培养池内开始计时，到设定的第 一次采样时间后，开动蠕动泵采样 约O．5ml，到菌体灭活池，采样时 蠕动泵正反方向运行相同时间，采 样结束后管道内不存液体。再过 20分钟，再次取样O．5rnl，定时采 样控制由微型计算机系统自动完 成。采样后手工完成采集样品的葡 萄糖含量测定。葡萄糖含量与细胞 数的转换也由微型计算机系统完 成，不同细胞的生长时期，葡萄糖 的利用与菌体数的关系，通过切换转换模式实现。 三、 测定结果 1．不同浓度的微生物细胞对葡萄糖的利用情况 以下是我们对摇瓶培养23小时的酿酒酵母发酵液多级稀释后，20分钟时间实际消 耗葡萄糖的测定结果，表中细胞浓度通过平板培养计数法测定。 表一：不同稀释比例酿酒酵母发酵液20分钟耗糖值 细胞稀释 l 3／4 l／2 1“ 1／8 1／16 1／32 7 7 6．66×103．28×101．64X1078．】9X】06 J 细胞浓度 1．31X】089．83×lO’ 4．09×106 测定l 97 71．S 52．9 3613 29．7 17．9 12．5 I 测定2 101．5 72 53．3 39．7 28．9 18．8 13．8 l 平均值 99．25 71．75 53．1 38．0 293 18．35 13．15j 把上表的平均值数据按细胞浓度作图，如结果如下： 实验结果显示，当细胞浓度低于2×107时菌体对葡萄糖的利用速度较快，当菌体浓 275 度高于2×107后，葡萄糖的消耗与菌 体浓度有较好的线性关系，在作计数 卸 测定时，必须对此非线性提供补偿。 ∞ 2．样品的重复测定试验： 曲 实验结果是否能重复是测定方 ∞ 法是否可行的根本依据，为了验证葡 萄糖消耗法测试细胞数这一方法，我 蚰 们分别对二次摇瓶培养的酿酒酵母 ∞ 作了重复计数测定，实验结果显示： 对于同一样品，仪器测定有较好的重 ^Im。o『I谴gv舞帮糖耀瓣$求。N 0 复性，测定误差小于10％。 100 细胞浓度(X106)