肿瘤细胞代谢的31P核磁共振的研究.pdfVIP

2001年增刊 分析试验室 Vol.20.Suppl 2001年11月 ChineseJournalofAnalyticalLaboratory 2001-11 肿瘤细胞代谢的31p核磁共振研究’ 黄荣清’，颜贤忠2，骆传环’，杜泽涵2 (I军事医学科学院放射医学研究所’，北京100850;2国家生物医学分析侧试中心2，北京100850) 摘 要:核滋共振技术具有非破坏性和无损伤性，能同时无损伤地监浏生物细胞内多种有机和无机化合物的浓度及史化 在肿疙细胞代谢的分析中应用越来越广泛.本文在获拜穗定的细胞”一8NR讲的基rt上，对两种肺瘤细胞的’.p一NMR讲 特点、细胞内含礴代谢物进行了分析，并用’,p一”HR技术对细胞胞内p“进行了测定，为生物核磁共抓及肿劝如胞代诸的 研究提供了无报伤性的分析方法. 关键词:核君共振:肿瘤:代谢 70年代，核磁共振侧MR)技术开始应用于生 碱卿)、磷酸乙醉胺伊助、塘的磷酸盐和AMP. 物医学领域并得到迅速发展[1,2]oNMR技术具有 如PC,PE,6-磷酸葡萄糖、6-磷酸果糖、AMP, 非破坏性 (nondestructive)和无损伤性 5-磷酸核糖和一些其它化合物可归属于PME 峰。 (noninvasive)，它能无损伤地监测细胞内很多有 磷脂类代谢物浓度的变化可能与膜更新代谢变化 机和无机化合物的浓度及变化。目前，NMR研究 有关。大多数肿瘤模型和人肿瘤的PME 升高，因 细胞用得最多的是31P-NMR，许多重要的含磷代 而认为PME升高与细胞增殖有关。肿瘤接受治疗 谢物在细胞中有较高浓度，31P-NMR能动态地一 后大多出现PME 降低。NMR技术可使PME 峰的 次同时监测活细胞内多种含磷代谢物的浓度变 重豆部分分离开，PME 峰被分为PC和PE等. 化，克服了许多生化分析方法的提取分离步骤， DPDE峰被认为是UDP-葡萄箱、NADP(H)和 具有独特的优点，在肿瘤细胞代谢的分析中应用 UDP-N.乙酞菊掩胺与UDP-N-乙酸半乳搪胺等。 越来越广泛。3争-NMR是从分子水平上研究细胞 N” 的峰主要来源于ATP的三个磷核，并有来自 代谢的，细胞与离体器官、活体动物的31P-NMR UTPGTP和CTP的少f贡献。在化学位移约 分析技术已成为非损伤地研究生物样品的有效方 -5.0，-10.0和 ·18.5ppm处出现三个碑的共振峰。 因为活细胞的共振峰宽，一般在谱图中较难区分 法. 1材料与方法 ATP和其它三磷酸核昔。在一18.5ppm处的13共振 人早幼粒白血病HL-60细胞，人淋巴瘤白血 峰仅由ATP的礴的共振产生，因此能对ATP进行 病Molt-4细胞分别在含10%胎牛血清的RPMI 定f,P-NMR讲给出了关于碑酷合成(PE,PC), 1640(GIBCO,USA)培养液中培养.核磁共振实验 磷醋降解(甘油礴酸胆碱和甘油确酸乙醉胺，GPC 在JNM-GX400型超导傅利叶变换NMR仪上进 和GPE).细胞能盘(PCr/NTP/Pi),pH值(P。位ilf), 行，31P-NMR工作频率为 161.83MHz。谱宽 搪蛋白蕊脂合成(DPDE)等信息. 10000Hz,数据点16384,脉冲宽度22.5us，弛豫 2.2.肿摘细胞代谢的”-Ii1R分析 延迟2.2s,线加宽因子20Hz,累加1200次，用液 细胞胞内的含礴化合物如ATP,P;,PE,PC, 氮降温的方法使被测细胞保持在4C。用亚甲基双 PCr和只等在”P-NMR谱中都有其特殊共振 磷酸作外标，规定磷酸肌酸的化学位移为Oppm, 谱线，因此能定性确定。ATP,ADP,AMP,P;和糖 亚甲基双碑酸的化学位移为21.42ppmP-NMR 的磷酸盐等与细胞的能f代谢密切相关，因此它 测定Molt-4细胞内pH参照文献p1 们的细胞内相对和绝对浓度在细胞代谢研究中有 2.结果与讨论 重要意义。这些化合物的快速转换和分布在细胞 2.1肿瘤细胞，-NIR进的特点 内不同区域使经