聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒标记人羊膜间充质干细胞与导入siRNA的研究.pdfVIP

不同胎龄人皮肤角质形成细胞生物学特性的实验研究 王哲1 施萍2刘晓玉1王喜良1张殿宝1庞希宁*1 1.教育部医学细胞生物学重点实验室，卫生部细胞生物学重点实验室， 中国医科大学干细胞与再生医学研究室，辽宁沈阳，110001 2.中国医科大学附属第一医院全科医学教研室，辽宁沈阳110001 [摘要]目的：比较不同胎龄人皮肤角质形成细胞的生物学特性，探讨胎儿无瘢痕愈合的机制。 方法：收集中国医科大学附属盛京医院产科意外流产的不同胎龄的胎儿小腿皮肤标本和整形外科手 术过程中作为供皮区的成人小腿的正常皮肤标本，患者均知情同意，医院伦理委员会批准。分别用两步 消化法和组织块法分离培养胎儿皮肤角质形成细胞和成人真皮成纤维细胞。将角质形成细胞按胎龄分为 小于28周组和大于28周。在倒置相差显微镜观察两种细胞形态，应用免疫荧光检测角蛋白和波形蛋白在 细胞内的表达，划痕实验观察两组角质形成细胞的迁移能力及两组角质形成细胞作用下成纤维细胞迁移 能力。 聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒标记 人羊膜间充质干细胞和导入siRNA的研究 王瑞1施萍2张殿宝1刘晓玉1庞希宁1* 1.教育部医学细胞生物学重点实验室，卫生部细胞生物学重点实验室， 中国医科大学干细胞与再生医学研究室，辽宁沈阳，110001 2.中国医科大学附属第一医院全科医学教研室，辽宁沈阳110001 [摘要]目的：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒是近来新发现的活体示踪剂和 转染剂，本实验以人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)为靶点，探讨聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁 磁性纳米颗粒对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的标记率和转染siRNA干扰目的基因。 方法：1.颗粒来源：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒购买于东纳生物科技有限公 司。2.实验方法：原代分离人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)，向人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)中加入10％ 胎牛血清，含20ug/L碱性成纤维生长因子(bFGF)的DMEM/F12培养基，置于37℃，体积分数为0.05 的CO2饱和湿度培养箱培养，待细胞达到80％-90％融合时用胰酶消化传代。取传至第三代的细胞放入 含DMEM/F12培养基的六孔板中。设立2个实验组和1个对照组，分别向两个实验组培养基中加入终 浓度为8ug/L的PEI-siGAPDH，对照组仅加入DMEM/F12培养基。3.实验评估：实验组于标记24h后， 分别用普鲁士蓝染色和Western-blot方法检测PEI-siGAPDH进入细胞和siGAPDH干扰情况。 结果：光镜下观察，发现终浓度为8ug/L的聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒普鲁士蓝染 色几乎为100％。Western-blot方法检测，发现终浓度为8ug/L的PEI-siGAPDH干扰组较对照组GAPDH 表达减低。 结论：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒能标记人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)和 导入小干扰RNA。为进一步应用人羊膜间充质干细胞移植治疗提供活体示踪方法奠定实验基础。 [关键词]人羊膜间充质干细胞；聚乙烯亚胺；四氧化三铁磁性纳米颗粒；标记;转染 高密度接种对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响 张殿宝1施 萍 2庞希宁1* 1.教育部医学细胞生物学重点实验室，卫生部细胞生物学重点实验室， 中国医科大学干细胞与再生医学研究室，辽宁沈阳，110001 2.中国医科大学附属第一医院全科医学教研室，辽宁沈阳110001 [摘要]背景：细胞密度是影响细胞分化与去分化状态的因素之一，对于细胞密度在TGF-beta1诱 导HaCaT细胞上皮间充质转化中的作用尚缺乏深入研究。 目的：观察细胞密度对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响。 方法：将HaCaT细胞分别以103/cm2和105/cm2接种于六孔板，使用2ng/mL的TGF-β1作用48h， 观察细胞形态变化，应用RealtimePCR和westernblot分别检测E-Cadherin、