中国土族人群中细胞色素P450+2C19基因多态性地研究.pdfVIP

中国土族人群中细胞色素P450 2C19基因多态性的研究 段于峰掣1武占鹏2张松3董兆文3 l怀化医学高等专科学校418000 2青海省互助土族自治县计划生育服务站810500 3国家计生委科学技术研究所分子生物研究室 北京10008l 摘要：为研究细胞色素P450 2C19在中国土族人群中的基因型，采用聚合酶链式反 应与限制性内切核酸酶片段长度多态性技术分析了100例无血缘关系土族人群的基 较，本实验得出的CYP2C19ml突变频率与文献报道相符。 关键词：细胞色素P450 2C19，基因型，聚合酶链式反应(PCR)，限制性内切酶片段 长度多态(RFLP) 细胞色素P450 药物遗传学研究最为关注的一类代谢酶。CYP2C19的药物遗传学作用最初是由KU 传多态性，其遗传遵循常染色体隐性遗传方式【1]。根据美芬妥英羟化代谢的水平， 个体表型可分为强代谢者(EM)和弱代谢者(PM)，且弱代谢者的发生率存在着明 显的种族差异，亚洲人(日本人和中国人)的PM发生率为13％r23％，明显高于欧 洲和非洲人的3％～6％[2，3】。 外显子5中第681个碱基对发生了单碱基突变(G—A)，导致核苷酸序列异常，改 变了mRNA可读框架，致使终止密码子过早出现而表达成无功能的酶蛋白[41。目前， 37 从上述研究可看出，cYP2C19ml是导致人群中s一美芬妥英羟化弱代谢者出现 的主要原因。由于PM的发生率在种族削有很大的差异，国内已有人对汉族、白族和 突变基因的多态性进行了初步研究，现将结果报告如下。 一、材料和方法 I、资料束源 100份EDTA抗凝血血样采白青海省互助土族自治县的无血缘关系的土族个体， 一20℃保存。 2、分析方法 (1)DNA提驳 利用常规酚／氯仿抽提法提取DNA[4】。 (2)基因型分析 参照文献，根据CYP2C19等位基因的第4个内含子与第5个外显子连接处两侧 的碱基序列合成特异性PCR引物，用以检测CYP2C19m1型突变基因[4】。 引物序列为 5’．AATTACAACCAGAGCTTGGC一3’ 5’．TATCACTTTCCATAAAAGCAAG．3’ u 0mmol／L KCI、3mmol／L PCR反应总体积501，含有1 Yris—HCl(pH8．3)、50mmol／L u u dNTP、0．25 mol／L的引物、0．3 MgCl2、0．2mmoFL g的DNA模板和2．0单位的 Taq 72。C Elmer 7min，PCR扩增是用Perkin 480热循环仪。扩增片段长度为169bp，将 u PCR产物20l用10单位的SmaI限制性内切核酸酶消化3小时后，进行8％的聚丙 Doe 1000紫外凝胶成像系统观察和分析。 稀酰胺电泳。电泳结果用BioRad的Gel 二、结果与讨论 药物遗传学的目的在于研究药物代谢中遗传因素的影响和不同基因型个体对药 物反应的差异，从而为临床有针对性地合理用药和根据不同基因型群体对药物的反应 来改进药物设计提供了理论基础依据。近十几年来，国内外有关药物代谢酶的研究主 一种结合酶(N一乙酰化转移酶NAT2)的个体和种族差异上。国内这方面研究开展 得相对较晚，而且我国是个多民族国家，有许多独特的基因资源可以利用。土族人群 CYP2C