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第九届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会 湖南师范大学
JI．8
长沙2003
黄孢原毛平革菌产锰过氧化物酶发酵条件的研究
杨晓宽路福平王海宽杜连祥
(天津科技大学食品科学和生物工程学院天津300222)
摘要Phanerochaete
Chrysosporium5．776在限氨高锰培养基中产生较高的锰过氧化物酶。通过对液体静
置培养条件的优化，其最适培养条件为：装液量30mL(250
mL三角瓶)；发酵限氨培养基pH4．5；采用终
浓度为6．7x106个孢子／mL的接种量；温度37。C；静置培养5d；产锰过氧化物酶活力达1445U／L．
关键词： 黄孢原毛平革菌，锰过氧化物酶，条件优化
类底物。白腐真菌可产生锰过氧化物酶，其中研究最多的白腐真菌为黄孢原毛平革菌
(Phanerochaete
木质素过氧化物酶(Lip)和锰过氧化物酶(Mnp)两类过氧化物酶。这两类酶均在细胞内合成，
然后分泌到细胞外，以H202为最初氧化底物阻71。降解木质素的微生物及其产生的酶在制浆工
业及转化木质素和木质纤维材料方面都具有工业潜力[41。
本文主要研究了装液量、接种量、培养基pH、培养温度等条件对黄孢原毛平革菌5．776产锰
过氧化物酶的影响，以确定其最适发酵条件。
l材料与方法
1．1菌种
黄孢原毛平革菌5．776购自中科院微生物所。
1．2培养基及培养条件
1．2．1斜面培养基(％)
100Brix麦芽汁培养基；琼脂，2；pH自然。
1．2．2平板培养基(％)
马铃薯，20：葡萄糖，2：琼脂，2；pH自然。
1．2．3发酵限氮培养基(％)”1
微量元素混合液，7ml。
0．2；VBl，O．0001；
微量元素混合液(g／L)
0．01：Na2M004·2H20，0．Ol；MnS04·H20，0．43。
1．2．4培葬条件
(1)斜面活化：从斜面挑出l×lmm的菌块接到麦芽汁斜面，370C恒温培养7d。
第一作者简介：扬晓竟(1973~)。男．硕士研究生t联系电话t(022)281∞580；1．3820834016
杨晓宽等：黄孢原毛平革菌产锰过氧化物酶发酵条件的研究
子／mL，在34。C下静置培养，按不同要求测定菌体干重及检测MnP活力。
1．3 MnP活力测定
取50mmol／L的乳酸钠缓冲液(pH4．5)3．4mL，1．6mmol／L
1．4菌体干重测定
在发酵过程中，每隔一定时间从恒温培养箱中取一瓶发酵液，用已称重的干燥滤纸进行抽滤。
而后将滤纸(连带菌体)在800C烘箱中烘至恒重，减去滤纸重量，即得菌体干重。
2 结果与讨论
2．1 采用发酵限氮培养基静量培养条件下黄孢原毛平革菌5．776的生长曲线和产酶曲线
采删发酵限氮培养基，测定菌丝干重和锰过氧化物酶
(MnP)活力随培养时问的变化，结果如图1。黄 一苗丝干重(glL)一MnP活力(U／L)
拿3 2000曩
孢原毛平革菌5．776生长到第4d基本达到顶峰，这与
崔
培养基中限量氮源耗尽有关【l】，而MnP活力在120h基： 王
鞭1 1000
(第5d)出现峰值，达到1200
U／L。MnP属于次级代
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