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雌激素受体基因SNPs与乳腺癌关系的研究 上海第二医科大学附属仁济医院肿瘤科 张凤春 徐迎春 吉林大学中日联谊医院血液肿瘤科 林玉梅 【摘 要】 目的：了解雌激素受体 a 基因（Estrogen receptoragene ，ESR1 ）的单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymor- phisms ，SNPs ）与乳腺癌的关系。方法：运用生物信息学的方法构建ESR1 基因的SNPs 连锁不平衡（Linkage Disequilibrium, LD ）图，通过聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ，PCR ）和限 制性片段长度多态性分析（Restriction Fragment Length Polymorphisms ，RFLP ）的方法检测了193 例中国汉 族女性乳腺癌患者和71 例正常女性对照ESR1 基因上三个SNPs 位点的基因型，以SPSS11.0 和Unphased 软 件进行病例对照关联分析。结果：XbaI 位点A 、G 等位基因在病例组和对照组分布差异有显著性（P ＜0.05 ）。 RS2077647 位点与RS2234693 位点构成的单倍型频率在病例组和对照组分布差异有显著性（P ＜0.05 ＝。 RS2077647 位点与患者年龄、肿瘤大小、PR 表达相关，XbaI 位点与患者有无远处转移相关（P ＜0.05 ）。结 论：XbaI 位点与乳腺癌发病高度相关；RS2077647 、RS2234693 本身可能不是决定乳腺癌易感的 SNPs 位 点，但其构成的单倍型可能是携带乳腺癌的抗性位点。RS2077647 、XbaI 位点尚与乳腺癌患者的部分临床 病理特征相关。支持ESR1 基因是乳腺癌发病的易感基因。 乳腺癌是一种雌激素依赖性肿瘤，雌激素通过雌激素受体发挥生物学效应，所以ESR1 基因与乳腺癌的发病和乳腺癌患者的内分泌治疗反应密切相关。ESR1 基因具有多态性，有 报道认为不同的ER 基因型可能决定不同个体间ER 表达水平和功能的差异，我们运用生物 信息学的方法和LD 分析的原理构建了ESR1 基因的SNPs 连锁不平衡图，以ESR1 基因上 三个SNPs 位点为切入点，探讨了其在中国汉族女性乳腺癌人群及正常人群中的分布特点以 及其与乳腺癌的易感性、临床表现、病理特征、受体表达的关系，现报道如下： 1材料与方法 1.1 研究对象 1997 年6 月～2002 年7 月我们收治的乳腺癌患者 193 例，皆为在吉林省居 住 10 年以上的汉族妇女；年龄23～75 岁，平均年龄48 岁；病程 1 个月～5 年。71 名正常 对照选自同期入院的体检的健康汉族妇女，无血缘关系和乳腺癌家族史；年龄25～72 岁， 平均年龄50 岁。 1.2 外周血标本采集与全基因组DNA 的提取 采取患者肝素抗凝外周血5 毫升，充分混 0 匀，-20 C 冻存。采用宁波星普液体微量DNA 纯化试剂盒提取全基因组DNA。 1.3 ESR1 基因片段的PCR 扩增 在包含选定SNPs 的目的基因DNA 片段的两端设计引物， 引 物 序 列 ， RS2077647 F ： 5’-TCTAACCTCGGGCTGTGCTC–3’ ， R ： 5’- C TGCTGTCCAGGTACACCTC-3’ ； RS2234693 与 XbaI 位 点 F ： 5’-G TCCATCAGTTCATCTGAG–3’，R ：5’-ACTACCTGCACCAGAATATG-3’。PCR 反应体系25µl ， 含 10mmol/Ltris-HCl （PH8.3），50mmol/L KCl，1.5mmol/L MgCl ，200mmol/L dNTP ，引物 2 各 15pmol/L，1.0UTag DNA 聚合酶和20ng～40ng 基因组DNA。据Tm 值选择适宜退火温 度进行温度梯度PCR ，条件为RS2077647 ，95℃ 变性5min ；97℃35s ，62 ℃40s ，72 ℃45s ， 2 循环；96℃35s ，60℃40s ，72 ℃45s ，10 循环；