大鼠子宫切除对卵巢激素变化和其黄体颗粒细胞凋亡影响的研究.pdfVIP

大鼠子宫切除对卵巢激素变化及其 黄体颗粒细胞凋亡影Ⅱ向的研究 薛晓鸥艾浩 (锦州医学院附属第一医院，锦州121001) 摘要研究单纯性子宫切除后，卵巢功能及黄体细胞凋亡变化情况。制成单纯性子宫切除 的大鼠模型，应用放免、TUNEL及电镜方法研究卵巢激素水平和黄体颗粒细胞凋 亡变化趋势。子宫切除后大鼠的卵巢激索水平呈更年期样变化．黄体颗粒细胞凋亡 指数呈增高趋势，黄体颗粒细胞凋亡符合细胞凋亡的一般形态学特征。单纯子宫切 除后．卵巢功能下降．黄体细胞碉亡指数增高；卵巢黄体颗粒细胞凋亡与卵巢激素的 周期性变化密切相关；卵巢激索可能参与了凋亡基因调控过程。 关键词大鼠；子宫切除；卵巢；黄体细胞；凋亡 近年来，随着子宫内分泌功能的日益揭示，人们越来越多地了解了子宫在生理、病理过程 中发挥的重要作用。单纯子宫切除后，睫着子宫内分泌作用的消失，卵巢黄体细胞的退化也将 受到一定的影响，而黄体退化对于维持正常的卵巢功能是必不可少的。本研究试图通过对子 宫与黄体细胞之间的内分泌调节关系的研究，来阐明子宫切除后大鼠卵巢激素及黄体颗粒细 胞退化规律的调节机制。 1材料和方法 1．1标本制备 1．1．1实验组动物模型 20例，选用SD雌性成年大鼠，常规手术切除子宫，均保留双侧卵巢。实验条件下喂养三 个月后，采用阴遭涂片法确定大鼠性周期情况．并分在发情前期、发情期、发情后期、发情间期 处死大鼠，每个情期设为一组，每组5只。处死采用大鼠断头术，随即采取血液和卵巢：血液室 温下静置10分钟，低温离心机提取血清成分，超低温冰箱中一20(3保存备用；一侧卵巢组织用 多聚甲醛固定后制成石蜡切片备用，另一侧卵巢用戊二醛固定后常规制成超薄切片备用。 1．1．2对照组动物模型 20例，选用SD雌性成年大鼠。分组及标本的制备方法同实验组。 1．2实验方法 1．2．1卵巢激素的测定 实验组及对照组均采用放射免疫测定试剂盒进行测定。E2(雌激素)、T：天津千叶生物 170 技术公司生产；P：天津九鼎医学生物工程有限公司生产。 1．2．2黄体颗粒细胞凋亡指数测定 胞。操作按调剂盒说明进行。 1．2．3黄体颗粒细胞凋亡的电镜观察 树脂包埋的卵巢黄体组织制成半薄和超薄切片。半薄切片用甲苯胺蓝染色。超薄切片进 行硝酸铀和醋酸铅常规电子染色。用JEOL-1200电子显微镜在60kV加速电压下观察。 。1．2．4统计学分析 1000个生殖细胞中的阳性标记细胞，阳性率用z2检验。卵巢激素结果与凋亡指数问关系采 用相关分析。 2 结果 2，1卵巢激素测定结果 对照组和实验组大鼠各情期卵巢激素水平变化符合性动情性特点。但子宫切除后．情后 降低。P0．05。T(睾酮)水平在各情期均无明显变化。 2．2 TUNEL染色 TUNEL法标记阳性细胞核呈棕褐色。阴性细胞呈蓝色。此结果表明：大鼠卵巢黄体颗粒 细胞的程序性死亡，主要是以凋亡的形式发生的。子宫切除后，凋亡指数有增高的趋势。其 化规律与黄体细胞凋亡指数呈负相关，r=一0．84．P0．05。 2．3电镜观察形态学所见 凋亡黄体细胞早期出现核染色质增多和聚集至核膜周边并呈月牙形或8字形斑块，细胞 体积缩小，细胞器如线粒体和内质网无明显变性；中期除核染色质继续积聚外，细胞器也肿胀 变性．部分细胞溶酶体增多．次级溶酶体外披单层膜．内含质地不均、高电子密度及空泡状物 质。核进一步固缩．呈块状；晚期细胞核碎裂。细胞器溶解，微绒毛和细胞．细胞连接丧失，胞浆 膜迅速内陷将细胞分割成多个大小不等的不连续凋亡小体，最终凋亡小体被吞噬细胞吞噬降 解。实验组与对照组在形态学上无显著差异。 171 3讨 论 3。1黄体细胞凋亡与黄体退化 排卵后滤泡发生着剧烈的变化．即颗粒细胞或卵泡膜细胞将转变为黄体细胞。卵巢黄体 化后，形成了内分泌腺——黄体。黄体在动物和人类的生殖过程中起着非常重要的作用。随 着对于黄体研究的日益深入，近来有学者提出