阿诺宁的抗瘤作用的研究.pdfVIP

阿诺宁的抗瘤作用研究。 谢球莽1冯公侃1苏秀客1束幸蜂1刘宗潮10橱仁洲2魏幸义2 (1．中山医科大学肿瘤防治中心肿瘤研究所广州5100∞； 2中国科学皖华南植物研究所广州510650) 自从1982年Jo啪等发现第一个番荔枝内酯化合物后，研究进展很快，至今发现这类 化合物近200种。根据美国国立肿瘤所(NCI)报道，从番荔枝植物分离提取的单体化合 物bulhtachl和a∞ic_m有强的抗瘤话性…，因此，被认为是继紫杉醇之后的又一个有前途 的天然来源的抗肿瘤化台物，其作用完全不同于目前临床应用的抗肿瘤药物。作用靶点 是线粒体NADH氧化还原酶，通过抑制ATP的产生而发挥其抗瘤作用[2]。阿诺宁是中 国科学院华南植物研究所从番荔枝(AnM 5口m”∞m)植物中提取制备的由番荔枝内醇 成分，它们均有强烈的抗瘤活性。我们先前的实验已证明，squ丑mocin可诱导人白血 病儿60细胞凋亡bj。体外试验，发现阿诺宁及单体化合物sqmm碱n对人结肠癌细胞 的Ic50值更明显小于9q1㈣In的Ic50bj。本文报告阿诺宁的细胞毒作用和抗瘤作用。 1材 料 1．1受试样品及试剂 阿诺宁是从番荔枝植物中提取制备的番荔枝内酯高效部位提取物，为微黄色半固状 物，临用前用DM90溶解。紫杉醇(tax01)作阳性对照药，上述样品均由华南植物研究所 杨仁洲教授提供。环磷酰胺(C1x)、二甲基亚砜(Dl船0)为国内产品，M兀、粉、RPMI． 1640培养基和Dl咂M培养基均为Si鲫公司产品。 1．2人癌细胞株 人结肠腺癌细胞(}rr．29)、人鼻咽癌低分化鳞癌细胞(cNE2和SI)r咂1)、人肝癌细胞 究所传代保株，除MCF-7细胞培养于含10％小牛血清的D^伍M培养液外，其他5种人 癌细胞均培养于RPMI．1“0培养液中。 1．3实验动物和瘤株 选用清洁级昆明小鼠，体重18～24 g，雌雄兼有，均由中山医科大学动物中心提供。 ∞国采自然科学基金(3蛐加龉6及中山医科大学“211”工程重点学科建设基金{98069)联台资助 。通讯作者：T乩86_20．877653鹋_7弘o；Fh：86_20Br砌：翌略虫趔丛弘世盟坦塑 ·238- 动物合格证：粤检证字96A46(Ⅱ级小鼠)。环境设施合格证号：广东省检证字号：96C16 (级清洁鼠)。小鼠瘤株：小鼠肝癌(H印s)和小鼠肉瘤s180，均由中山医科大学肿瘤研究 所治疗基础室传代保株。 2方 法 2．1体外细胞生长抑制试验(M，rT法)c4] 取对数生长期的人癌细胞0．5×105～1，0×105川，分装于96孔培养板中，0．2】】】l／ 孔。实验设阴性对照组、溶剂对照组、阳性药(ta)d)组和阿诺宁5～6个不同浓度组。药 物与细胞培养72h，在实验结束前4 h每孔加入盯液20 h后吸弃培养 pI(5旭／Ⅱd)，4 液，加人DMsOO．1“／孔，待结晶溶解后置ELISA酶联检测仪，用570∞波长测各孔的 光密度(OD)，按下列公式求生长抑制率，并用POMs软件程序求出半数抑制浓度(IC∞)， 进行评价和比较。 生长抑制率％=(·一嚣蒹詈黼)×，oo 2．2体内抗瘤试验 按卫生部药政局编《新药(西药)临床前研究指导原则汇编》中的“抗肿瘤药物药教学 指导原则”规程进行实验。设阴性对照组(生理盐水)、DM90溶剂组、环磷酰胺(CⅨ)组 及阿诺宁3～4个不同剂量组，每组IO～12小鼠，接种肿瘤后随机分组，次日给药，每天腹 腔注射(ip)一次，连用10天，停药次日处死小鼠，称体重，剥出肿瘤称瘤重，按下面公式计 算肿瘤生长抑制率(％)： 抑瘤率c-R，％=(t一面丽塞雾譬譬嘉譬‰)×·oo 2．3统计学处理 Cal汕tion wilooxon Syste叶(39)Litchfield 用Phama∞崎c