海洋硫酸多糖药物911微量分析方法地研究.pdfVIP

海洋硫酸多糖药物91 I微量分析方法的研究 吕志华，郑瑞津，王远红，徐家敏 (中国海洋大学海洋药物与食品研究所，山东青岛 266003) 摘要采用高效液相色谱结合柱后荧光衍生技术，建立了海洋硫酸多檐药物911的微量分析方法。 色谱柱为A埘嗽ⅢⅨ一87H(30DX7．Sm)，流动相：5nnnol／L H2s04，流速：0．6mL／min，柱温：25℃。柱后衍 在激发波长k249nm和发射波长Xem 435nm下检测。该方法911的检测限为0．01rIg／mL，以葡萄糖醛酸 为内标，在0．02一1．00ng／mL内，r=09978，RSD为5．9％(n=6)，蜂高与浓度线性关系良好。 关键词硫酸多糖药物911；柱后荧光衍生；高效液相色谱 911是一种海洋硫酸多糖类药物，是以海藻提取物一褐藻酸经降解、分级、纯化得到聚甘古糖醛酸，再经硫酸化而制得的 聚甘古酯。经研究发现，911可以通过免疫调节和抑制病毒活性等多种途径发挥抗艾滋病毒作用，而且克服了其他多糖类药 物生物利用度低，抗凝活性强的缺点，目前该药正在进行临床研究。为进行9ll的体内药物浓度分析，本文利用高效液相色 谱柱后衍生技术对911的微量定量分析方法进行了研究，初步建立了911的微量定量分析方法，并对该方法在血清样品中的 应用作了初步探讨，为色谱法研究其药代动力学参数奠定了基础。 1仪器及试药 1100 高效液相色谱仪Angilents谢瞄(美国安捷伦科技有限公司)；PCx 5200柱后衍生仪(PickeriIlg 纯。 2方法 2．1 9ll对照品的制备 将9Ll样品过Se岫G一15柱得到的911对照品。 2．2 9ll的荧光衍生 激发波长(Ex)和发射波长(Em)，扫描速度：60rⅡn／min。 2．3色谱条件 Pad公司)，流动相：Snuml／L 3mL／min，混合后，流入荧光检测器在激发波长蛔【249ran和发射波长Xeal435nm下检测。 ·571· 第一届海洋生物高技术论坛论文集 2．4标准溶液和内标溶液的配制 释成不同浓度的标准系列溶液，浓度范围为o．01ne,／mL…2．00qg／mL。标准溶液于冰箱中储存，备用。 另精密称取内标物葡萄糖醛酸50rag，同法配制成浓度为lng／mL的储备液，置于冰箱中待用。 3结果 3．1检测911的柱后衍生反应 为能够高灵敏度地检测911，试验了三种糖类的荧光衍生试剂盐酸胍、精氨酸和2一氰基乙酰胺。三种试剂在一定的条 件下均可与911生成具有荧光的衍生物。比较各种衍生物的相对荧光强度，盐酸胍与911作用效果明显好于其它二种试剂。 在相同样品浓度和相同反应时间内，911与盐酸胍反应生成的衍生物荧光强度是2一氰基乙酰胺的几十倍。911与盐酸胍反 应生成的衍生物的荧光激发和发射光谱如图l。其荧光衍生反应机理如下： H N 0 + H C H二H