木霉对灰霉病菌的拮抗机制和生防效果的研究.pdfVIP

234Il本量对蓝量癌t的搐拭扭制噩生随致墨的班宝 木霉对灰霉病菌的拮抗机制及生防效果的研究 阚国仕 陈红漫 李贺民 苗青 (沈阳农业大学生物科学技术学院 沈阳 110161) 灰霉病(Bo‘rytis cinerea)是保护地番茄生产的主要病害之一，世界各地的温室、大棚中广泛发 生。至今缺少抗灰霉病而农艺性状又好的番茄品种，保护地长期连作造成灰霉病菌在土壤中的大 量累积，加之在保护地冬春季生产中，有一段时间处于低温高湿而有利于灰霉病发生的环境条件 下，近年来，番茄灰霉病发生日趋严重，已成为制约番茄生产的一个重要因素，给人们生产生活带来 巨大的经济损失。寻找有效防治番茄灰霉病的方法势在必行，化学防治手段虽然在一定时期达到 了有效防治目的，但近年来环境污染日趋严重、农药残留逐年增加及病菌抗药性大大提高，人们的 身心健康已受到严重威胁，化学防治方法的使用已受到限制。随着人们环境意识的提高和对无公 害蔬菜的需求，人们开始探索利用生物手段来防治番茄灰霉病，达到生物问题生物解决的目的，进 而使生态系统良性循环，收到良好的经济效益和社会效益。 本文在离体及室内人工控制条件下，系统研究了生防木霉拮抗菌株的筛选及其生防机理，并对 木霉拮抗菌抗病相关蛋白进行了分离纯化及理化特性测试。 本文从生防木霉拮抗菌的分离筛选人手，采用自然界分离、离体筛选和活体筛选的方法，成功 获得了1株生防效果较好的木霉拮抗菌株，即为T-30，其生长速度快、抑菌作用强，抑菌率达70％ 以上；活体筛选的防效达50％以上，能有效防治番茄灰霉病，且生防稳定性好。 文献报道木霉拮抗菌的防病机制有营养竞争作用、重寄生作用、胞外酶降解作用和抗生作用等 多种假说，本文通过以几丁质为惟一碳源诱导木霉拮抗菌株T-30产生胞外几丁质酶和其他多种抑 病相关酶系，对胞外酶降解作用机制进行了全面系统研究，产生的胞外几丁质酶及其相关酶系能有 效水解灰霉菌细胞壁，进而达到防治目的。研究证实了木霉拮抗菌产生胞外几丁质酶及其抑病相 关酶系是木霉拮抗菌防治番茄灰霉病的重要机制。实验选取木霉拮抗菌株T-30，采用红糖液体培 养基发酵培养的方法，对木霉拮抗菌株自身产生抑病相关蛋白作了活性测定，包括几丁质酶、B．I，3 葡聚糖酶、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和超氧化物歧化酶(SGD)。结果表明，木霉拮抗菌可通过这些抑 病相关蛋白协同作用来有效防治番茄灰霉病。 本项研究选取各木霉拮抗菌株，苗期番茄植株(6～7片叶)的叶片，采用接种与挑战接种处理， 研究了木霉拮抗菌对番茄防御酶系，包括几丁质酶、苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、多酚氧化酶和过氧 化氢酶的影响，结果表明不同木霉拮抗菌株引起番茄叶片产生的防御酶系也有不同程度的变化，其活 性有不同程度的提高。说明木霉拮抗菌能诱导番茄植株提高防御酶系活性，达到防病抗病的目的。 实验选取木霉拮抗菌株T一30进行液体发酵培养，通过几丁质诱导其产生几丁质酶，并对所产 生的几丁质酶进行分离纯化及动力学测定。分离纯化方法采用逐级纯化方法，即硫酸铵盐析法、圆 G一100柱层析法，分离纯化后 盘非变性电泳法、DEAE一纤维素(DEAE一32)柱层析法、Sephadex 可达一个峰。 本实验还对木霉拮抗菌所产胞外酶主要成分之一几丁质酶进行了动力学系统分析，采用 SDS—PACE法测定分子量为42 KDa；采用等电聚焦电泳法测定等电点(pI)为5．3；测定最适反应 ●■■■塞些珏撞缝敢生理±!：化塞些曲盔崖235 5．5；最适影响离子强度为0．1M NaCI；金属离子对酶活力的影响为：Mg“、Ca“、Mn2+对酶活力有 较明显的激活作用，酶活比对照提高了50％左右，而Fe”和Hg+对酶有较强的抑制作用。 通过本实验的研究可为生防木霉拮抗菌的应用和推广提供理论依据和技术支持，为工业化生 产生防木霉拮抗菌剂做好基础。 1 木霉拮抗菌株的筛选 1．1试验材料与方法 1．1．1试验材料木霉拮抗菌(Trichoderma cinema spp)Tl～T32；灰霉致病菌