照射对创伤愈合过程中成纤维细胞的影响和形态计量学研究.pdfVIP

第九届中国视体学与图像分析学术会议 2001年北京 照射对创伤愈合过程中成 纤维细胞的影响及形态计量学研究 王德文 秦全红 彭瑞云 高亚兵 崔雪梅 夏国伟 (军事医学学科学院放射医学研究所北京100850) 目的和意义：照射是引起创伤愈合延迟的重要原因之一，尤其是术 后病人放疗常引起皮肤切口长期不愈。成纤维细胞是创伤愈合中 主要的修复细胞之一，参与创伤愈合的全过程；照射引起成纤维细 胞永久性的损伤，使其结构损伤和功能抑制，最终导致伤口愈合延 迟。既往研究表明外源性生长因子(TGF8l、PDGF等)可以促进全 身或局部照射后伤口的愈合。迄今关于照射复合创伤愈合过程中 成纤维细胞损伤规律及其分子机理和内源性生长因子对放射复合 创伤中成纤维细胞的调控等尚未见报导。本研究应用经典病理 学、免疫组织(细胞)化学、分子病理学、原代细胞培养、流式细胞以 及图像分析等技术方法，在整体、细胞以及分子水平定量研究了在 单纯创伤和放射复合创伤愈合过程中成纤维细胞的长消规律、作 用及其调控机制。 材料和方法：将156只二级Wistar大鼠随机分为对照组(单纯创伤 组，n=78)和照射组(照射复合创伤组，n=78)。麻醉状态下，于大 鼠胸背部制作直径为15cm的皮肤全层伤口，对照组伤后不做任 何处理，照射组于术后即刻用”c07射线局部照射，照射剂量为 28、45、60、90、180天活杀取材观察。用经典病理学(宏观、光镜、电 镜)、特殊染色、免疫组织化学、原位末端标记、原位杂交、原位 PER、原代细胞培养、流式细胞和图像分析等方法，定量研究照射 复合创伤愈合过程中成纤维细胞的形态变化、长消规律及其调控 114 第九届中国视体学与图像分析学术会议 叽制。 结果 l，皮肤单纯创伤愈合过程经历6个阶段：炎症反应期、肉芽组 织形成初期、肉芽组织旺盛期、肉芽组织消减期、瘢痕愈合期和组 织改建期。成纤维细胞是主要修复细胞，参与创伤愈合的全过程。 2．照射组创伤愈合过程各时相均延长滞后；炎症反应减弱、肉 芽组织形成较晚且结构不良、上皮覆盖滞后，愈合延迟，创面平均 01)，皮肤附属器出现晚，胶原含量下降且排列紊乱。 3．对照组成纤维细胞数量急剧增多，经历增殖(伤后1—5 天)、高峰(7一lo天)和消减()15天)三个时期的变化。照射组伤 口成纤维细胞数量明显较对照组减少，且高峰时相滞后，15天时 达高峰(表1、图1)。 4．羟脯氨酸(nyp)测定结果：对照组伤后5天Hyp含量逐渐增 高，21天达到高峰，随后下降，但60天时仍略高于正常皮肤含量； 照射组伤口Hyp含量在各时间点均明显低于对照组，且高峰时间 后滞，在伤后28天达到高峰。 5．电镜观察发现两组创伤愈合过程中伤口成纤维细胞在不同 时间呈现不同的超微结构特点，可分为六型：过渡型成纤维细胞 (伤后1—2天)、增殖型成纤维细胞(伤后2—10天)、合成分泌型 成纤维细胞(5—2l天)、肌成纤维细胞(5—21天)、转化型成纤维 细胞()15天)和凋亡型成纤维细胞(3—28天多见)，其中增殖型成 纤维细胞表现增殖活跃的特点，胞核及核仁较大、粗面内质网丰 富，轻度扩张，内含致密的絮状物，高尔基体增多。合成分泌型成 纤维细胞可见粗面内质网和高尔基体十分丰富，轻、中度扩张，并 每伴胶原原纤维分泌象。肌成纤维细胞含有丰富的微丝及密体和 密斑。照射后各型成纤维细胞出现后滞，尤其是肌成纤维细胞的 数量明显减少，细胞凋亡出现早且数量多，在创伤愈合的整个过程 115 第九届中国视体学与图像分析学术会议 2001年北京 始终伴随着凋1L=；胶原分泌象少，细胞外胶原排列无规则。 6．照射组成纤维细胞形态发生变异，出现较多大小不 、形态 不规则的畸形成纤维细胞(即放射性成纤维细胞)，其结构和功能 每见损伤。 7照射组成纤维细胞分泌生长因子功能受到抑制：免疫组化 学方法检测两组伤口以及原代培养的肉芽组织成纤维细胞内TGF R1、PDGFA、PDGFR pl、T