应用酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒囊膜糖蛋白(GP5)与基质蛋白(M)自身抗独特型抗体的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 应用酶联免疫吸附试验检测猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒 1孙淑芳，1郑增忍，1蒋正军，。张衍海，2宣华，3周恩民 IowastateUnivetUSA) (1农业部动物检疫所，青岛，266032；2解放军军需大学；3 sity 组序列分析表明PRRSV的RNA分子为1 的蛋自均已证实为与囊膜相关的病毒囊膜蛋白。 病相关。 以及PRRSV感染猪是否将成为持续性感染或非持续性感染状况。 1、材料与方法 1．1抗PRRSV抗体 中，再将透析袋置于0．01M 分装于一80℃备用。 1头。第一至第五组猪 将这些猪分别分成5组，每组含12头，其中PRRSV感染组中的第1组仅有1 血清样品直至屠宰。收集的血清置一20E备用。 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 1．1．3 剂盒检测抗PRRSVN蛋白的抗体。应用竞争免疫荧光试验检测抗GP5和抗M抗体的方法基本同 PH 株病毒。然后将猪血清样品用0．01M 7．2 加入FITC一羊抗鼠IgG，显色。 0．1M的磷酸盐缓冲渡(PH3．5)中，37E作用12小时，用3MTris碱溶液调PH至7．0终止反应。 应用蛋白A亲和层析柱纯化F(ab’)2片段。 缓冲液中，并与等体积等量的福氏佐剂混合(Difco 部分点注射。每隔14天注射一次，共免疫3次。第一次应用福氏完全佐剂，第二次和第三次分gU用福 氏非完全佐剂。每次免疫前和最后一次免疫后的14天均采集血清作为鼠Ab一2s用。 0，0IM 4℃过夜，应用洗液(PBST 猪Iga(H+L)过氧化物酶或羊抗鼠IgG H2SO。终止显 色(50ul／孔)并在OD。nm自动酶标显读机阅读OD值。 1．6 Aab一2s定性 倍数，分％llJln入含Mab 过氧化物酶和底物，显色后，选择OD。为1的猪血清稀释度作为抑制剂，并用该抑制剂与不同稀释度 的鼠Aab一2抗血清等体积混合。混合物以100ul体积加至包被了Mab 3次，加TMB显色l5分种，H2SO。终止显色后，阅读ODm值和计算竞争抑制率。 其抑制率按以下公式计算： 100 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 2、结果 GP5和抗M蛋白抗体。 2．2 PRRS阴性对照猪450份血清样品与正常鼠IgG 抗Mab一19Bd阳性、329份样品视为抗Mab一19Bd阴性。 和Mab一19Bd)仅出现在2 能从血清中分离出病毒。免疫Mab一1 在第28天其效价可达10万倍，即将鼠血清稀释lO万倍后其OD。sonm仍大于0．4。 2．3 的独特位点为抗PRRSVAbl的共同位点。 367 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 3、讨论 别产生相应的抗体。根据Jernes独特型网络学说理论，这些抗体又可以作为相应的抗原，刺激机体产 Mab一25、Mab一19 有127份样品为Aab一2s抗Mab一25阳性和316份样品抗Mab一25阴性，1 PRRSV自身抗独特型抗体的存在与感染乙肝病毒和免疫甲状腺球蛋自等刺激机体产生Aab一2相一致， 这进一步证实Jernes提出的免疫网络学说调控反应的机理。 猪是否成为持续感染的可能性，至于出现不同时期的Aab一2s在结构、功能以及其它生物学特性以及怎 样影响PRRSV的免疫尚有待进一步的研究。 的单克隆抗体以及来源于鼠的Ab2的单克隆抗体研究工作正在进行之中。 参考文献(略) 应用酶联免疫吸附试验检测猪繁殖和呼吸 障碍综合征病毒囊膜糖蛋白(GP