酒精对纤维素酶作用的研究.pdfVIP

酒精对纤维素酶作用研究 周晓宏 陈洪章 李位虎 (中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100080) 摘要 研究了酒精时两种纤维素畴Penicilliumdecumbe、纤维素醉和Trichodermavivid。纤维素踌的抑制 作用。酒精对两种纤维素醉的醉解特化均有抑制作用，且抑制作用随着酒精浓度的升高而增加，随着 A度的升高而加强。籍化徽晶纤维素96小时，P.decumbena纤维素阵在酒精浓度 ‘1%时产生的还原 特在50℃时最高，当酒精浓度)3%,--7%时，产生的还原掩在4000时最高。T.wide纤雄素阵在无 酒精时，产生的还原枪在50℃时最高，在酒精浓度)1%,-}7%时，产生的还原扮在40℃时最高。 I%的酒精时P.decumbenap-荀萄箱菩醉有徽弱的抑制作用，而3%,5%,7%,9%的酒精则对其有 促进作用，并随著酒精浓度的升高而加强。酒精对T.viridep一荀萄转替薛有抑制作用，酒精浓度越 高，抑制作用越大。酒精对两种纤维素膝的抑制作用是可逆的。 关锐词恤nicillimndecumbeasTrichodermavivid)纤雄素醉 纤维素 归一荀萄抽普睁 酒精 同梦 犬 化发酵(SXSF)可簇性 1 前言 木质纤维素是地球上最丰富的可再生资源，有望成为代替化石能源的可再生能源，而由木 质纤维素生产的能源酒精则有可能代替汽油成为将来的汽车能源。同步糖化发酵 (SSF)已被证 明是最有效的生物法纤维素制酒精工艺之一，它有效解除或降低了纤维二糖和葡萄搪的终产物 反馈抑制作用，大大提高了纤维素酶解糖化的速度，但SSF产生的酒精对纤维素酶有抑制作用， 对不同的纤维素酶抑制程度不同，所以研究酒精对纤维素酶的抑制作用对纤维素同步糖化发酵 制酒精研究具有非常重要的意义。 酒精对纤维素酶的抑制作用已有少量的几篇报道，Takagi等发现在加人6%的酒精 (w/v) 时，对10%的纤维素进行酶解搪化24小时，产生的还原糖减少了60%;Aspergillusniger俘一葡萄 糖昔酶能被8%的酒精抑制，而T.meseip一葡萄糖昔酶则不敏感[loHimshiOoshima等DI用T. viride纤维素酶对5%的纱纸进行酶解，发现酒精对纤维素酶有明显的抑制作用，通过园二色性 光谱分析，证明在4M的酒精浓度下，纤维素酶并未发生明显的变性，但酒精对纤维素酶在纤维 素上吸附有影响，酒精浓度越高，吸附量越低。而通过对酒精纤维素酶溶液进行减压蒸馏，发 现酒精对纤维酶的抑制作用是可逆的。4M的酒精对T.widep一葡萄糖昔酶无抑制作用。 作者在研究纤维素同步糖化发酵制酒精过程中，发现绝大部分纤维素酶的滤纸酶活和p一葡 萄糖昔酶酶活不是纤维素酶解成葡萄糖的最佳比例1:1，如木霉纤维素酶通常滤纸酶活高而日- 葡萄糖昔酶酶活低，曲霉和青霉则滤纸酶活低而R一葡萄糖昔酶酶活高，所以若将两种来源的纤 维素酶配合使用，则可提高纤维素酶的利用率，基于这种考虑，有必要同时对这两种来源的纤 维素酶进行酒精抑制作用研究，以便为两种纤维素酶共同同步糖化发酵纤维素制酒精提供依据。 以前的研究多在同一温度下进行，本研究则在不同温度下进行了温度对酒精抑制纤维素酶 作用的影响。 2 材料与方法 材料 纤维素酶:1,Trichodermaviride纤维素酶，购自上海丽珠东风生物技术有限公司，酶活〕 15000a/g，经测定FPA约为600lu/g,p一Gase约为110Mg.2,自产Penicilliumdecumbens纤维 素酶 一般情况下的FPA为15IU/g干曲，p一葡萄糖昔酶约为72.9IU/g干曲。两种酶的最适pH 453 为4.8,FPA最适温度为50%o 微晶纤维素，D(一)一水杨素购自北京化学试剂公司。 方法 酒梢对两种纤维素酶酶解糖化作用 分别称取0_5g微晶纤维素加人若干支试管中，再分别取FPA为1.16IU/ml,3(一葡萄糖昔酶 为0.193IU/nd的Tricbodermawide纤维素酶4.1和FPA为0.83IU/nli,p一葡萄糖昔酶为6.23IU/ ml的Peni