以小鼠为模型评价重组伪狂犬病病毒rPRV-HA免疫效力.pdfVIP

620 2005学术年会 以小鼠为模型评价重组伪狂犬病病毒 rP RV—H A的免疫效力 郑宝亮+，周国辉’，田志军。，仇华吉++，杨焕良，尹训南，胡守萍，童光志一 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江，哈尔滨，150001 TCID50 病病毒(rPRV—HA)进行了免疫效力评价。按每只105．0rPRV—HA的剂量通过滴鼻接种8周龄雌性BALB／ 28d用105．0 疫对照组均可检测到针对PRV的荧光抗体；从rPRV—HA免疫组可以检测到针对SIV的荧光抗体和血凝抑制抗体， 而各对照组均呈阴性。攻毒后从rPRV—HA免疫组小鼠未分离到攻击病毒，血凝抑制抗体显著升高，病理变化比对照 组显著轻微，表明rPRV—HA免疫小鼠可以抵抗同亚型SIV的攻击，可以作为rPRV—HA免疫效力评价模型。 关键词：伪狂犬病痛毒；H3N2亚型猪流感病毒；重组病毒；小鼠模型；免疫效力 猪流感(Swine 流感容易引起继发性病毒感染和细菌感染，使感染猪病情加重，造成较大经济损失。SIV被认为是导 致猪呼吸道疾病综合征的三大主要病原体之一，已成为严重危害许多国家猪群的疾病。根据血清学调 virus，PRV)属于疱疹病毒 型，几乎全国各地均有流行(李海燕等，2003)。伪狂犬病病毒(pseudorabies 科的疱疹病毒成员，是伪狂犬病(PR)，或称为奥耶茨基氏病的病原。伪狂犬病病毒感染成年猪可以建 立潜伏感染。PRV宿主谱很广，可以感染多种哺乳动物，对初生仔猪、母牛、犬、啮齿类动物等易感动 物具有致死性。毫无疑问伪狂犬病已成为危害全球养猪业最严重的传染病之一，在我国的流行和危害 也十分严重(何启盖，2000)。 PRV为长度约145kb的线状双链DNA病毒，拥有庞大的基因组和许多非必需区，可以插入和表 达外源基因，理想的活疫苗载体。以PRV弱毒疫苗株作为载体表达插入的外源基因有很多优势，可以 达到双价或多价疫苗的作用。本实验中应用的PR弱毒载体是一种gI／gE双基因缺乏弱毒疫苗 毒力基因缺失降低了弱毒株回复毒力可能性，所以这种弱毒苗是安全的(Xu等，2004)。 接种疫苗是预防和控制猪流感的有效手段，但是根据调查，目前在中国的猪群几乎都未注射sI疫 苗(李海燕等，2003)。研究表明，猪的种闯屏障比较低，猪呼吸道上皮细胞存在流感病毒的鼹种受体而 能被人、禽等所有流感病毒感染，是人流感病毒和禽流感病毒双重感染的”混合器”，所以控制sI有深 远的公共卫生学意义。本实验室构建了表达H3N2亚型SIVHA基因的重组伪狂犬病病毒rPRV— HA，以期作为猪流感一伪狂犬病二价基因工程疫苗，用于伪狂犬病和猪流感的预防。本文拟以小鼠作 为模型评价rPRV—HA的免疫保护效果。 *对本文贡献相同。 **通讯作者：gztong@hvri．∞．cn；huajiqiu@hvrl．辩。鳓 兽医部分 62l 1材料与方法 1。1细胞、病毒及血清 几种病毒支持细胞由本实验室保存。PRV 所伪狂犬病课题组保存和提供。H3N2亚型猪流感病毒A／Swine／Inner 型sIV (简称SwilLJ74)，由农业部动物流感重点实验室提供。 1．2小鼠的免疫和攻毒 隔离室，恒温(20—24℃)全日光照自由采食和饮水，饲养1周后用于动物试验，试验整个过程中饲养条 件不变。 试验鼠共分为4组： 第1组：rPRV—HA免疫组(n=60)，滴鼻接种，剂量为每只105．0TCID50； 第2组：Bartha—K61免疫对照组(n=60)，接种途径和剂量同上； 第3组：非免疫攻毒对照组(n=20)； 第4组：非免疫不攻毒对照组(n=10只)，不攻毒，仅用于表征及体重变化对照。 SwH[．J74进 免疫接种采用C02麻醉后的鼻腔吸入法。免疫后第28d，第1。3组用105．0TC