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第十三章 基因工程与基因组学概述 教学目的和要求： 1. 了解基因工程的含义、实施步骤及应用了解基因分离与鉴定的方法了解基因组学、后基因组学的含义基因组图谱构建方法 教学重点和难点： 【教学重点】基因工程的基本原理和技术；目的DNA的分离和鉴定；基因组图谱构建DNA的分离和鉴定；基因组图谱构建 第一节 基因工程 一．概述 二．限制性内切酶 三．基因工程的应用 第二节 基因组学 一．概述 二．基因组图谱的构建 三．基因组图谱的应用 四．后基因组学 五．基因组印记 第一节 基因工程 一．概述 遗传工程（genetic engineering），也称生物工程，利用工程技术的方法改造和修饰生物体，使其产生新的性状或产品，从而改良生物体的一种遗传学手段。 核心是利用重组DNA技术，在分子水平上操作修饰改变生物体。 细胞工程（cell engineering） 基因工程（gene engineering） 酶工程（enzyme engineering） 发酵工程（fermentation engineering） 基因工程（gene engineering）：利用人工的方法把生物的遗传物质在体外进行切割、拼接和重组，获得重组DNA分子，然后导入宿主细胞或个体，使受体的遗传特性得到修饰或改变的过程。 二．限制性内切酶 三．基因工程的流程及相关技术 获得外源DNA片段（分）↓ 限制性内切酶切割外源DNA片段与载体（切）↓外源DNA片段与载体连接（接）↓重组DNA分子转入宿主细胞（转）↓重组子的筛选与鉴定（筛）↓目的基因的确认与分析 （一）外源DNA片段的分离方法 构建基因组文库分离法 差别显示反转录PCR 利用聚合酶链式反应技术扩增目的基因 （二）、外源DNA片段与载体的切割和连接 通过用相同的限制性内切核酸内切酶切割形成一个重组DNA分子 （三）、重组DNA转入宿主细胞 1.重组DNA转入原核细胞 热激转化法 电穿孔转化法 2.重组DNA转入真核细胞 农杆菌转化法 （四）重组子的筛选与鉴定 1.插入失活筛选法 2.蓝白斑筛选 3.核酸杂交 4.PCR检测 5.测序 6.生物学活性检测 四．基因工程的发展应用 1、基因工程是生物科学基础研究的重要手段 2、利用转基因技术改良植物已取得很大进展并在生产上应用 3、利用基因工程获得大量重组的蛋白、疫苗药物 4、利用基因工程进行不同物种之间的基因传递提供了可能。 转基因动植物--“生物工厂”推荐参考书：1、《基因工程原理与方法》，孙树汉编，人民军医出版社2、《基因工程原理》，吴乃虎编，科学出版社（侧重原理）3、《现代基因工程技术导论》，陈章良编，科学出版社（侧重应用）4、《分子克隆》(第三版)，J. Sambrook et al. 科学出版社（具体的实验方法，分子生物学研究的圣经） 第二节 基因组学 一．概述 基因组(genome)：泛指一个有生命体、病毒或细胞器的全部遗传物质；在真核生物，基因组是指一套染色体（单倍体）DNA。 基因组学(genomics)：就是发展和应用DNA制图、测序新技术以及计算机程序，分析生命体（包括人类）全部基因组结构及功能。 基因组学研究内容 结构基因组学(structural genomics) 功能基因组学(functional genomics) 比较基因组学(comparative genomics) 二．基因组图谱的构建 1、遗传图（连锁图） 连锁图(linkage map)，是指基因标志在染色体上的遗传距离，即确定各基因在基因组中的相对位置和排列顺序。 遗传距离通常由基因在四分体时期染色体交换过程中分离的频率厘摩（cM）来表示。 遗传标记类型： 形态标记（morphological marker） 细胞学标记(cytological marker) 生化标记(biochemical marker) 分子标记(molecular marker) 2、物理图 以已知核苷酸序列的DNA片断（序列标签位点, STS）为“路标”，以碱基对作为基本测量单位（图距）的基因组图。 DNA上两点的实际距离，即确定基因在染色体上的实际排列顺序，从而对基因定位。 3、转录图 以EST（expressed sequence tag ，表达序列标签）为标记，根据转录顺序的位置和距离绘制的图谱。 4、序列图 序列图是指整个人类基因组的核苷酸序列图，也是最详尽的物理图，既包括可转录序列，也包括非转录序列，是转录序列、调节序列和功能未知序列的总和。 这是人类基因组计划最繁重、耗时最多的工作。 三．基因组图谱的