液相色谱-质谱联用分离、鉴定硫代葡萄糖苷地研究.pdfVIP

LC-063 液相色谱．质谱联用分离、鉴定硫代葡萄糖苷的研究 袁丽风 郭伟强 (浙江大学化学系浙江杭州310028) 摘要 从菜籽中提取硫苷，经弱阴离子交换剂DEAE A-25做预处理，得到硫苷提取 SephMex 液。经反相离子对液相色谱确定分离条件，采用液相色谱一电喷雾接口一质谱联用，再经紫 外扫描进一步确证，同时分离鉴定了菜籽中三种类型的硫苷。 关键字：反相离子对色谱；液相色谱一质谱联用；硫苷；紫外扫描；离子交换 1前言 硫代葡萄糖苷(简称硫苷)是十字花科蔬菜中一种重要的次生代谢产物，其一般的结构如图 1，由于侧链R基团的不同，可以把硫苷分为脂肪类、芳香类和吲哚类硫苷。十字花科蔬菜 中还含有内源芥子酶，硫营在其作用下容易水解产生异硫氰酸酯、硫氰酸酯和腈类等化合物， 这些降解产物可以抑制真菌和微生物的生长，还可以通过诱导泛醌还原酶的活性成为致癌物 的阻断剂，但蔬菜中含有过多的硫苷，将对蔬菜的营养价值产生负面的影响。80年代，硫 苷的分析方法主要是气相色谱三甲基硅烷基化衍生法(TMS)。90年代后，反相高效液相色 谱质谱联用法(LC—MS)成为硫苷主要的分析方法，但这种方法需要将硫苷预先进行脱硫 处理，前处理工作耗时太多。毛细管电泳曾被Feldl等用于 硫苷的分离，这种方法可以省去脱硫处理的过程，但由于硫 ／S—C6H1105 苷分子的电荷密度较低，所需的分离时间很长。反相离子对tc—L太 色谱对于带电荷物质的分离是一种比较理想的方法，彭爱娟 ’N—O—S03_K1 簟型璺竺丁基溴化铵作为离子对试剂成功的分离了油菜籽 囤1硫苷的一般结构 中的硫百。 本文以挥发性的三乙胺为离子对试剂，利用电喷雾接口将反相离子对色谱与质谱联用，分离 鉴定了菜籽中多种硫苷。 2实验部分 2．1仪器与试剂 3000 1100化学工作站；Esquineplus质谱仪；KQ一100 Agilem1100型高效液相色谱仪；A垂lem A-25； UV-265型紫外扫描仪；自制层析柱。DEAE 型超声波清洗器；Shimadzu Sephadex RelimilC18：甲醇为色谱纯；二次蒸馏水：其它试剂均为分析纯。选用浙江省农科院种植的 油菜籽为样品。 2．2硫苷的提取 取109菜籽粉碎，用石油醚于索氏提取器中进行脱脂处理，低温干燥，制得脱脂菜籽粉备用。 取29脱脂菜籽粉于烧杯中，在沸水浴中干蒸5分钟后，加入2滴巯基乙醇和25ml水浸提 A．25的层析柱中，然后用O．02mol几的醋酸吡啶溶液 取液。取提取液注入DEAEScphadex 和水各20ml淋洗，再用0．5mol／b的硫酸钾溶液20ml洗脱，收集洗脱液备用。 2．3液相色谱，质谱条件 色谱柱为Relimil ％三乙胺，用醋酸调节pn为7．0；紫外检测波长230rim；液相色谱，质谱为负离子模式电喷 219 1100 化学工作站完成。 2．4紫外扫描 收集各组分硫苷，以流动相做参比进行紫外扫描。扫描波长200-500nm，吸光度范围由各组 分硫苷最大吸收波长处的吸光度大小决定。 3结果与讨论 3．1分离条件的选择 因硫苷为有机盐类物质，故选择反相离子对色谱分离模式。运用正交实验设计方法，得到流 动相组成流动相组成为甲醇：水=10：90、0．1％三乙胺、pH为7．0，检测波长230nm， 流速lml／min时，硫苷的分离效果良好(见图2)