异硫氰酸荧光素-鸡卵清白蛋白流动注射化学发光反应地研究.pdfVIP

第20卷增刊 分析试脸室 Vol.20.Suppl. 2001年i1月 ChineseJoumalofAnalysisLaboratory 2001-11 异硫氛酸荧光素一鸡卵清白蛋白流动注射化学发光反应的研究 黄春保，’‘，莫小曼 ，‘慈云祥’，常文保2 (1.黄冈师范学院化学系，黄州438000;2.北京大学化学与分子工程学院.北京 100871) 摘 要:系统地研究了在峨性介质和阳离子表面活性俐CTAB存在下，NaC10救化异硫氛酸荧光素~鸡卵清白蛋白标 记物的化学发光行为和化学发光反应的条件，提出了反相流动注舫化学发光aq定鸡卯清白蛋白的新方法，该法侧 定鸡卵清白蛋白线性范围为0.08-16yg/d.，检出限为。.048yg/mL. 关健词:异硫氛故灸光素:鸡卯清白蛋白;化学发光反应;流动注封法 研究发现，在碱性条件下，选用适当的氧化 发光，但发光能力不强:OVA未观察到氧化发光现 剂氧化异硫佩酸荧光素(FITC)，能产生化学发光， 但发光强度很弱。若将其标记到鸡卵清白蛋白 (OVA)上，不仅标记物更易于氧化;发光能力极 大增强，且体系的发光强度与蛋白质的含量呈良 好的线性关系。通过条件选择及优化。提出了反 相流动注射化学发光测定OVA的新方法。 1实验部分 1.1仪器与试剂 GD-1型微光测量仪 西〔北有色地质研究所): 吐/.亩. LP-1型蠕动泵(北京东方仪器设备公司);自动平 衡记录仪 (上海大华仪表厂):OVA(AR.，Sigma 图1流动注射体系装盆流程图 公司)。lmg/mLFIX溶液;9.OX10mol/LNaCIO R:蛋白质标记物;R:CTAB:R,:NaC10溶液 溶液 (pH=9.5);8.0X10mol/LCTAB溶液。 P:姗动泵:S:六通阀:F:流动池;w:废液 1.2实验方法 D:检测器;R:记录仪 1.2.1标记方法 采用Marshall标记法u.于 象:而FICT-OVA标记物却具有很强的氧化发光能 比色管中依次加入 40m邪VA1.5mL水. 力。向含有标记物的试液中，注射NaC10溶液3s 0.5nLNaC10-Na2CO3缓冲溶液(pH9.5)，摇匀后缓 后即有光信号响应，los时发光强度达最大值，随 慢滴加ImLFITC溶液，混合均匀后里于冰箱(4C‘) 后迅速消失。由此可见，FITC-OVA-C10一体系是快 速发光体系。 中反应12h。用G-25色谱柱分离，收集FITC-OVA 2.2试验条件 试验了不同类型表面活性剂对体系化学发光 标记物并定容20mL。工作液由该液准确稀释250 强度的影响。结果表明，仅阳离子表面活性剂对 倍制得。 1.2.2测定方法 采用反相流动注射法.侧定 FITC-OVA-CIO-体系的发光强度有增强作用。其中 CTAB的增敏效果最佳，能使体系的发光强度增强 装ti流程和试液的混合顺序、流速如图1所示。 10倍。进一步的试验表明。CTAB浓度在$.0x1丁~ NaC10溶液通过旋转六通阀注入，每次注射体积为 10011L。试液在流动过程中混合。并立即流进发 1.2X10-mol/L范围内，体系的化学发光强度最大