酶解法制备氨基寡糖素生产工艺地研究.pdfVIP

酶解法制备氨基寡糖素生产工艺的研究 Researchonthe Production of Technology O¨gOsaccharin by EnzymaticHydrolysis 杜声亮1王士奎2 (1．河北廊坊师院生物系065000；2．广西北海国发海洋生物产业股份有限公司536000) t 摘要本文介绍砖一种酶解法制备氨基寡糖素生产工艺的阶段性研究成果，该工艺以微生物发酵的 方法制备壳聚糖降解酶系的粗酶制剂，再进行壳聚糖的酶水解制备新型无公害农药一一o．5％氨基寡糖 此工艺基础上可进行原药生产及精制甲壳酶制剂的制备． 关键词氨基寡糖素晦解工艺 甲壳低聚糖(chitosan 抗病剂。 氨基寡糖素就是以甲壳低聚糖为主要成分的新型无公害农药，具有广泛的应用前景，目前国内已 有多家企业已经生产或准备生产此类寡糖农药。 本文介绍一种取得阶段性研究成果的酶解法制备O．5％氨基氨糖素的生产工艺。 一、材料和方法 1、菌株：BeiHai No．1．(Bacillussp．) 2、壳聚糖及其它原材料均为工业级产品 释放因子0．07％，消泡剂0．06％ 4、发酵规模 0．6—5．0吨 5、壳聚糖降解酶系的诱导：菌种接入发酵培养基中，通气搅拌培养3卜36h，发酵液作为粗酶制 剂用于壳聚糖水解反应。 40一50℃条件下反应4—12h。反应混合物经灭酶活后即为氨基寡糖的浓糖液。 静置30m，收集壳聚糖沉淀洗涤至中性，干燥至恒重后定量测定。另取事先灭活的发酵液按同样方法 操作，作为对照。 酶活力按下式计算： W，W2，r×106 式中：w·为对照中壳聚糖的重量(g) w；为酶酶解后反应混合物中残余壳聚糖重量(g) T为酶解时间(m) 规定：在最适条件下，每分钟转化1微克壳聚糖为水溶性组分的酶量为一个活力单位。 356 8、酶解产物分析 8．1氨基寡糖素质量分数的测定 定量酶解反应混合液调PH至8．0，静置30rn，离心去沉淀，定量上清液用盐酸加热水解2b，中和 后，取定量水解液按Elson-Morgan法测氨基葡萄糖含量，以推算氨基寡糖素的质量分数。 8．2酶解产物中氨基寡糖素分子量分布的初步测定 定量酶解液调PH至8．0，离心(3000r／min 15min)收集未降解壳聚糖(组分I)，向上清液中加 入等量无水乙醇，静置12h，离心(3000r／rain 5m)收集50％醇折沉淀(组分Ⅱ)，再向50％醇析上 清液中加入等量无水乙醇，静置12h，离心(3000r／min 醇析上清液减压浓缩后进行活性炭—硅藻土柱层析，蒸馏水洗脱无机盐及单糖后，60％乙醇洗脱寡糖， 洗脱液减压浓缩，真空干燥(组分IV)。 二、结果和讨论 I、氨基寡糖分段醇析产物性质 组分II(50％醇析产物)。部分溶于水，无还原性。 组分RI(75％醇析产物)，溶于水，无还原性。 组分Ⅳ(75％醇析上清寡糖组分)，溶于水，有还原性。 可以推断，具有还原性的小分子寡糖分布在组分Ⅳ中，而75％醇析产物(组分RI)可能是短链的 壳聚糖低聚物，因此可溶性的壳聚糖大部分有在于50％醇析的上清液中，部分有在于50％醇析产物(组 分II)中。 2、酶解时间与寡糖分子量的关系 除控制反应混度，反应PH值之处，酶解反应的时间与产物中寡糖分子量分布有密切关系(见表I) 表I 反应时间与寡糖分子量分布的关系(酶：6％壳聚糖=l：IOvht) 表I的结果表明，延长酶反应时间可获得高产率的可溶性壳聚糖，但过长的反应时间，可造成单 糖及二糖的产